натрий хлористый по ГОСТ 4233-77;
воду дистиллированную по ГОСТ 6709-72.
2.1.2. Подготовка к исследованию
2.1.2.1. Приготовление флотационного раствора
К 1 горячей воды добавляют 400 г хлористого натрия, тщательно размешивают, выдерживают 30 мин и фильтруют через вату или складчатый фильтр в чистую склянку. Плотность флотационного раствора должна составлять 1,3 .
2.1.2.2. Исключен с 1 января 1988 г.
2.1.3. Проведение исследования
2.1.3.1. Из пробы выделяют навеску кала массой 3-5 г, помещают навеску в ступку, заливают 15-20 воды, размешивают до жидкой консистенции и процеживают через марлю в центрифужные пробирки.
Пробирки центрифугируют в течение 5 мин с частотой вращения 5000 . Жидкую часть сливают, затем добавляют 10 флотационного раствора, тщательно перемешивают палочкой и повторно центрифугируют. При помощи петли из каждой пробирки берут по три капли раствора, наносят на предметное стекло и накрывают покровным стеклом. Определяют наличие ооцист под микроскопом. После проведения одного исследования петлю обжигают.
2.2. Метод определения количества ооцист в кале
2.2.1. Аппаратура, материалы и реактивы
2.2.1.1. Для проведения исследования применяют аппаратуру, материалы и реактивы, указанные в п. 2.1.1, и дополнительно счетную камеру Горяева.
2.2.2. Проведение исследования
2.2.2.1. Взвешивают 5 г кала, взятого из отобранной пробы, и тщательно размешивают в ступке с 45 воды. Полученную суспензию фильтруют через один слой марли, осадок отбрасывают. 10 фильтрата помещают в центрифужную пробирку и центрифугируют в течение 5 мин с частотой вращения 5000 . Жидкую часть сливают, к осадку добавляют 10 флотационного раствора, тщательно перемешивают и еще раз центрифугируют в течение 5 мин с частотой вращения 5000 . Из пробирки снимают при помощи петли поверхностный слой жидкости и в счетной камере Горяева подсчитывают количество ооцист во всех 225 квадратах. Для определения количества ооцист в 1 г кала, подсчитанное в камере Горяева, число ооцист умножают на 1111.
2.2.3. Обработка результатов
2.2.3.1. У домашней птицы наличие 50000 ооцист на 1 г кала не влияет на зоотехнические показатели цыплят, обнаружение более 100000 ооцист на 1 г кала свидетельствует о заражении средней степени, обнаружение ооцист в количестве более 300000 на 1 г кала - о высокой степени заражения и малой эффективности применяемого препарата.
У крупного рогатого скота и овец наличие до 1000 ооцист в 1 г кала свидетельствует о низкой степени заражения, до 5000 - о средней степени заражения, более 5000 - о высокой степени заражения.
У кроликов наличие до 10000 ооцист на 1 г кала служит признаком низкой степени заражения, до 100000 - высокой степени заражения, более 100000 - очень высокой степени заражения.
2.3. Метод исследования павших или убитых животных
Сущность метода заключается в выявлении и определении с помощью микроскопа различных стадий кокцидий в пробах, взятых при паталого-анатомическом вскрытии животных. У животных исследуют желудочно-кишечный тракт, при этом учитывают наличие в крови паталого-анатомических изменений, локализацию, а также размер, форму, цвет, структуру стадий развития.
2.3.1. Аппаратура и реактивы
2.3.1.1. Для проведения исследования применяют:
ножницы по ГОСТ 21239-77;
пинцеты по ГОСТ 21241-77;
Чашки лабораторные стеклянные по ГОСТ 25336-82;
пипетки пастеровские;
натрий хлористый по ГОСТ 4233-77;
воду дистиллированную по ГОСТ 6709-72.
2.3.2. Проведение исследования
2.3.2.1. Исследуемые части кишок кладут в чашки Петри или другую посуду и разрезают в продольном направлении. Несколько капель содержимого кишки разбавляют на предметном стекле физиологическим раствором, накрывают покровным стеклом и рассматривают под микроскопом. Можно также соскабливать краем предметного стекла слизистую оболочку пораженной кишки. Соскоб разбавляют физиологическим раствором и рассматривают под микроскопом для установления наличия мерозоитов, шизонтов или гамет кокцидий.
У павших кроликов исследуют беловатые очаги в печени и содержимое желчного пузыря на наличие ооцист кокцидий Eimeria. Очаги разрезают и с помощью пастеровской пипетки наносят их содержимое на предметное стекло. Накрыв препарат покровным стеклом, рассматривают его под микроскопом. Аналогичным образом поступают и с поражениями почек гусей.
2.3.3. Обработка результатов
2.3.3.1. Для своевременной диагностики кокцидиоза у домашней птицы подсчет ооцист проводят один раз в 7 дней, начиная в двух-, трехнедельного возраста цыплят. Из каждой группы вскрывают по 4-6 ослабленных птиц. Исследуют соскобы со слизистой и содержимое кишечника в месте перехода двенадцатиперстной кишки в тощую, середины тонкого отдела кишечника и слепых кишок. Несколько капель наносят на предметное стекло, разбавляют водой и накрывают покровным стеклом. Просматривают под микроскопом 20 полей зрения, определяют среднее количество ооцист на одно поле зрения и проводят идентификацию кокцидий вида Eimeria в соответствии с ключом идентификации, представленном на схеме. В зависимости от клинических проявлений, степени и характера изменений отделов кишечника, локализации поражения и стадий развития кокцидий определяют виды ооцист Е. tenella, E. necatrix, E. acervulina, E. maxima, E. ргаесох. (см. схему. См. с. 339).
2.3.4. Оценка результатов
2.3.4.1. Наличие ооцист видов Е. acervulina менее 50 и ооцист Е. tenella, Е. necatrix, Е. maxima менее 5 кокцидий в поле зрения - признак низкой степени заражения.
При установлении разных стадий развития кокцидий в большом количестве у павших птиц или животных кокцидиоз считают причиной падежа.
2.4. Метод исследования подстилки на наличие ооцист кокцидий
Сущность метода заключается в подсчете количества ооцист в 1 г подстилки и определении по данным подсчета тяжести клинического течения кокцидиоза и резистентности кокцидий к используемому антикокцидиозному препарату.
2.4.1. Аппаратура, материалы и реактивы
2.4.1.1. Для проведения исследования применяют аппаратуру, материалы и реактивы, указанные в п. 2.1.1.
2.4.2. Проведние исследования
2.4.2.1. Пробу подстилки хорошо перемешивают и взвешивают 100 г. Заливают 1 воды, выдерживают до набухания содержимого и тщательно размешивают. Полученную суспензию фильтруют через марлю, осадок отбрасывают. Фильтрат тщательно перемешивают и отбирают 100 в центрифужную пробирку. Центрифугируют в течение 5 мин с частотой вращения 5000 . Жидкую часть сливают, к осадку добавляют 50 флотационного раствора, тщательно перемешивают и центрифугируют в течение 5 мин с частотой вращения 5000 . Из пробирки снимают при помощи петли поверхностный слой и в счетной камере Горяева подсчитывают количество ооцист во всех 225 квадратах. Полученное число ооцист умножают на 5555, и определяют количество ооцист в 1 г подстилки.
2.4.3. Исключен с 1 января 1988 г.
2.5. Метод установления интенсивности инфекции
2.5.1. Проведение исследования
2.5.1.1. Интенсивность инфекции ооцистами Eimeria или другими формами развития этого рода устанавливают подсчетом их в микроскопическом препарате и делением полученного числа на 3.
2.5.2. Обработка результатов
2.5.2.1. Подсчитанное число ооцист делят на 3. Это число будет равным числу паразитов в 1 г кала. В зависимости от этого для самых патогенных видов Eimeria устанавливают следующие степени интенсивности инфекции:
слабая инфекция (+) - 1-10 ооцист на 1 г кала;
средняя инфекция (++) - 11-100 ооцист на 1 г кала;