В стакан вместимостью 200 
взвешивают 
г продукта. Мороженое предварительно освобождают от глазури и других отделяемых компонентов. В пробу продукта добавляют 100 
дистиллированной воды, нагревают смесь на водяной бане до температуры 75°C, добавляют 15 
раствора сульфата меди (II) и продолжают нагревать до получения сгустка, который фильтруют через фильтровальную бумагу, промывают его теплой водой до обесцвечивания фильтрата. Осторожно сливают осадок, перемешивают его с безводным сульфатом натрия до получения зернистой массы.
взвешивают г продукта. Мороженое предварительно освобождают от глазури и других отделяемых компонентов. В пробу продукта добавляют 100 дистиллированной воды, нагревают смесь на водяной бане до температуры 75°C, добавляют 15 раствора сульфата меди (II) и продолжают нагревать до получения сгустка, который фильтруют через фильтровальную бумагу, промывают его теплой водой до обесцвечивания фильтрата. Осторожно сливают осадок, перемешивают его с безводным сульфатом натрия до получения зернистой массы.7.1.4 Жиры, масло и пасты масляные
В стакан вместимостью 100 
помещают 
г продукта и выдерживают в термостате при температуре 
°C до разделения продукта на жир и воду. Отделяют верхнюю жировую фракцию при температуре не более 40°C, аккуратно перелив ее в другой стакан, фильтруют через сухую фильтровальную бумагу так, чтобы вода не попадала на фильтр.
помещают г продукта и выдерживают в термостате при температуре °C до разделения продукта на жир и воду. Отделяют верхнюю жировую фракцию при температуре не более 40°C, аккуратно перелив ее в другой стакан, фильтруют через сухую фильтровальную бумагу так, чтобы вода не попадала на фильтр.7.1.5 Сметана и продукты на ее основе
В пластиковую или стеклянную бутыль вместимостью 500 
помещают пробу продукта, центрифугируют при 5000 об/мин в течение 30 мин. При этом продукт разделяется на два слоя: верхний - жировой, содержащий почти весь жир, и нижний - белковый. Центрифужные емкости с расслоившимся продуктом нагревают до температуры 
°C. Отделяют верхнюю жировую фракцию при температуре не более 40°C, аккуратно перелив ее в другой стакан, фильтруют через сухую фильтровальную бумагу так, чтобы вода не попадала на фильтр.
помещают пробу продукта, центрифугируют при 5000 об/мин в течение 30 мин. При этом продукт разделяется на два слоя: верхний - жировой, содержащий почти весь жир, и нижний - белковый. Центрифужные емкости с расслоившимся продуктом нагревают до температуры °C. Отделяют верхнюю жировую фракцию при температуре не более 40°C, аккуратно перелив ее в другой стакан, фильтруют через сухую фильтровальную бумагу так, чтобы вода не попадала на фильтр.7.1.6 Творог и творожные продукты
В пластиковую или стеклянную бутыль вместимостью 500 
помещают 
г продукта и добавляют 300 
смеси хлороформа и этилового спирта в соотношении 2:1 (по объему). Бутыль закрывают крышкой, закрепляют на лабораторном перемешивающем устройстве и перемешивают в течение 0,5 - 1,0 ч.
помещают г продукта и добавляют 300 смеси хлороформа и этилового спирта в соотношении 2:1 (по объему). Бутыль закрывают крышкой, закрепляют на лабораторном перемешивающем устройстве и перемешивают в течение 0,5 - 1,0 ч. Полученный экстракт фильтруют в стакан вместимостью 200 
через сухой складчатый фильтр. Для отделения жировой фракции стакан помещают на 1 ч на водяную баню или в сушильный шкаф при температуре 
°C.
через сухой складчатый фильтр. Для отделения жировой фракции стакан помещают на 1 ч на водяную баню или в сушильный шкаф при температуре °C.7.1.7 Сыр и сырные продукты
Пробу продукта измельчают в ступке с раствором безводного сульфата натрия до получения зернистой массы.
7.1.8 Из пробы продукта, подготовленной по 7.1.1 - 7.1.7, пентаном экстрагируют жир. Пентан удаляют выпариванием на водяной бане при температуре 
°C до получения прозрачного жира. Не допускают выплескиваний и кипения.
°C до получения прозрачного жира. Не допускают выплескиваний и кипения.7.2 Приготовление раствора калия гидроокиси с массовой долей 40%
В мерную колбу вместимостью 100 
помещают 
г калия гидроокиси, добавляют небольшое количество дистиллированной воды и аккуратно перемешивают. Объем раствора доводят дистиллированной водой до метки и перемешивают.
помещают г калия гидроокиси, добавляют небольшое количество дистиллированной воды и аккуратно перемешивают. Объем раствора доводят дистиллированной водой до метки и перемешивают. Срок хранения раствора в бутыли из темного стекла при температуре 
°С - не более 1 мес.
°С - не более 1 мес.7.3 Приготовление спиртового раствора дигитонина массовой концентрации 10 
В мерную колбу вместимостью 100 
помещают 
г дигитонина и растворяют в небольшом количестве этилового ректификованного спирта. Объем раствора доводят этиловым ректификованным спиртом до метки.
помещают г дигитонина и растворяют в небольшом количестве этилового ректификованного спирта. Объем раствора доводят этиловым ректификованным спиртом до метки. Срок хранения раствора в бутыли из темного стекла при температуре 
°С - не более 1 мес.
°С - не более 1 мес.8 Условия проведения измерений
При проведении измерений в лаборатории необходимо соблюдать следующие условия:
| - температура окружающего воздуха | ...  °C; |
| - относительная влажность воздуха | ... от 30% до 80%; |
| - атмосферное давление | ... от 84 до 106 кПа. |
9 Проведение измерений
9.1 В коническую колбу вместимостью 500 
помещают от 100 мг до 15 г жира, выделенного в соответствии с требованиями раздела 7, добавляют 10 
раствора гидроокиси калия с массовой долей 40% и 20 
этилового спирта.
помещают от 100 мг до 15 г жира, выделенного в соответствии с требованиями раздела 7, добавляют 10 раствора гидроокиси калия с массовой долей 40% и 20 этилового спирта. Присоединяют к колбе воздушный холодильник и нагревают смесь на водяной бане до получения прозрачного раствора, Затем продолжают нагревание еще 30 мин или 1 ч.
9.2 Добавляют 60 
дистиллированной воды, затем 180 
этилового спирта, нагревают смесь на водяной бане до 40°С. Добавляют 30 
спиртового раствора дигитонина массовой концентрации 10 
, перемешивают вращательными движениями и охлаждают при температуре 5°С в течение 12 ч,
дистиллированной воды, затем 180 этилового спирта, нагревают смесь на водяной бане до 40°С. Добавляют 30 спиртового раствора дигитонина массовой концентрации 10 , перемешивают вращательными движениями и охлаждают при температуре 5°С в течение 12 ч, 9.3 Собирают выделившийся дигитонин стерина, пропуская полученный раствор через фильтрующую воронку с диаметром лор 80 мкм и фильтровальную бумагу,
Промывают осадок на фильтре водой температурой 5°С до прекращения пенообразования, затем промывают последовательно с 25-50 
этилового спирта и с 25-50 
диэтилового эфира.
этилового спирта и с 25-50 диэтилового эфира. 9.4 Полученный осадок вместе с фильтровальной бумагой помещают в сушильный шкаф и высушивают при температуре 
°С в течение 10-15 мин. Сухой остаток на фильтре является дигитонином стерина.
°С в течение 10-15 мин. Сухой остаток на фильтре является дигитонином стерина. 9.5 В коническую колбу вместимостью 25 
помещают 
мг дигитонина стерина, добавляют 1 
уксусного ангидрида, нагревают на глицериновой бане при температуре 130°С - 145°С до растворения дигитонина, после чего нагревание продолжают еще 2 мин. Затем раствор охлаждают до 80°С.
помещают мг дигитонина стерина, добавляют 1 уксусного ангидрида, нагревают на глицериновой бане при температуре 130°С - 145°С до растворения дигитонина, после чего нагревание продолжают еще 2 мин. Затем раствор охлаждают до 80°С. Не используют прямой нагрев раствора, так как возможно разбрызгивание.
9.6 К охлажденному до 80°С раствору (9,5) добавляют 4 
этилового спирта, перемешивают, слегка нагревают для растворения стерил ацетата, который может кристаллизоваться.
этилового спирта, перемешивают, слегка нагревают для растворения стерил ацетата, который может кристаллизоваться. 9.7 Теплый раствор фильтруют через бумажный фильтр средней фильтрации, промывая этиловым спиртом. Полученный фильтрат постепенно нагревают до слабого кипения, В кипящий раствор аккуратно по каплям из пипетки с одновременным энергичным встряхиванием добавляют 1,0-1,5 
дистиллированной воды до такого состояния, пока стерил ацетат не начнет выпадать в осадок, но при этом еще возвращаясь в раствор (до насыщенного раствора). В образующийся осадок стерил ацетата добавляют несколько капель этилового спирта, Охлаждают на воздуха 2 ч и затем окончательно в холодной воде 30 мин.
дистиллированной воды до такого состояния, пока стерил ацетат не начнет выпадать в осадок, но при этом еще возвращаясь в раствор (до насыщенного раствора). В образующийся осадок стерил ацетата добавляют несколько капель этилового спирта, Охлаждают на воздуха 2 ч и затем окончательно в холодной воде 30 мин. 9.8 Выделившийся стерил ацетат фильтруют через фильтровальную бумагу высокой фильтрации, применяя фильтрующее устройство (колба Бунзена и воронка Бюхнера) с водоструйным насосом, и промывают кристаллы 1 
этилового спирта (80% об.).
этилового спирта (80% об.). 9.9 Выделившиеся кристаллы для повторного растворения нагревают с 1 
этилового спирта. Охлаждают 15 мин на воздухе, затем 5 мин в холодной воде. Выкристаллизовавшийся стерил ацетат фильтруют по 9,8.
этилового спирта. Охлаждают 15 мин на воздухе, затем 5 мин в холодной воде. Выкристаллизовавшийся стерил ацетат фильтруют по 9,8. 9.10 При необходимости (для лучшей очистки) рекристаллизацию и фильтрацию повторяют 3-4 раза.
9.11 В коническую колбу вместимостью 25 
помещают 10 мг стерил ацетата, добавляют 1 
этилового спирта, аккуратно перемешивают и добавляют 1-2 капли раствора гидроокиси калия с массовой долей 40%.
помещают 10 мг стерил ацетата, добавляют 1 этилового спирта, аккуратно перемешивают и добавляют 1-2 капли раствора гидроокиси калия с массовой долей 40%. 9.12 Раствор нагревают на кипящей водяной бане до начала закипания и растворения стерил ацетата.
9.13 Добавляют 10 
дистиллированной воды. Раствор переносят в делительную воронку вместимостью 100 
, добавляют 25 
диэтилового эфира и встряхивают. После разделения смеси водный слой удаляют.
дистиллированной воды. Раствор переносят в делительную воронку вместимостью 100 , добавляют 25 диэтилового эфира и встряхивают. После разделения смеси водный слой удаляют. 9.14 Оставшийся слой промывают тремя порциями по 5 
дистиллированной воды. Затем переносят в коническую колбу вместимостью 50 
и выпаривают насухо.
дистиллированной воды. Затем переносят в коническую колбу вместимостью 50 и выпаривают насухо. 9.15 Остаток растворяют в 10 
этанола (80% об.). Каплю раствора помещают на предметное стекло для микроскопии, равномерно распределяя ее по поверхности, закрывают покровным стеклом, выдерживают до начала кристаллообразования по краям предметного стекла, переворачивают и смотрят под микроскопом по мере кристаллизации при линейном увеличении в 200 раз. Формы кристаллов стеринов оценивают визуально, сравнивая их со сравнительным образцом.
этанола (80% об.). Каплю раствора помещают на предметное стекло для микроскопии, равномерно распределяя ее по поверхности, закрывают покровным стеклом, выдерживают до начала кристаллообразования по краям предметного стекла, переворачивают и смотрят под микроскопом по мере кристаллизации при линейном увеличении в 200 раз. Формы кристаллов стеринов оценивают визуально, сравнивая их со сравнительным образцом. Формы сравнительных образцов представлены в приложении А.
10 Обработка результатов измерений
Если при визуальном осмотре под микроскопом кристаллы стеринов имеют форму параллелограмма с тупым углом 100° (см. приложение А), что характерно для холестерина (сholesterol), то считают, что анализируемая проба не содержит растительного жира.
Если при визуальном осмотре под микроскопом хотя бы отдельные кристаллы стеринов имеют удлиненную шестиугольную форму с вершиной 108° (см. приложение А), характерную для растительных стеринов (phytosterol), или кристаллы имеют перевернутый угол ("ласточкин хвост") (см. приложение А), типичный для смеси холестерина и растительных жиров, то считают, что анализируемая проба содержит растительный жир.
11 Требования безопасности
При выполнении работ необходимо соблюдать следующие требования:
- помещение лаборатории должно быть оборудовано общей приточно-вытяжной вентиляцией в соответствии с ГОСТ 12.4.021. Содержание вредных веществ в воздухе рабочей зоны не должно превышать норм, установленных ГОСТ 12.1.005;
- требования техники безопасности при работе с химическими реактивами в соответствии с ГОСТ 12.1.007;
- требования техники безопасности при работе с электроустановками в соответствии с ГОСТ 12.1.019.
Помещение лаборатории должно соответствовать требованиям пожарной безопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.004 и быть оснащено средствами пожаротушения в соответствии с ГОСТ 12.4.009.
_____________________________