Национальный стандарт РФ ГОСТ Р 54014-2010 "Продукты пищевые функциональные. Определение растворимых и нерастворимых пищевых волокон ферментативно-гравиметрическим методом" (утв. приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии о стр. 2

Амилоглюкозидаза* удельной активностью 400 ед./мг по [1].

Эфир петролейный.

Этиловый спирт 95% об. по ГОСТ 5962.

Этиловый спирт 78% об.: смешать 207 дистиллированной воды по ГОСТ 6709 и 793 этанола 95% об. по ГОСТ 5962.

Раствор фосфатного буфера 0,08 , рН 6,0: растворяют 1,4 г динатрий гидрофосфата ( ) по ГОСТ 245 или 1,752 г динатрий гидрофосфата дигидрата ( ) по ГОСТ 200 и 9,68 г натрия дигидрофосфата моногидрата ( ) по ГОСТ 11773 в 700 воды, доводят рН до 6,0 с помощью гидроокиси натрия (NaOH) по ГОСТ 4328 или фосфорной кислоты ( ) по ГОСТ 6552, разбавляют водой по ГОСТ 6709 до 1000 .

Раствор гидроокиси натрия (NaOH) 0,275 : разбавляют 275 раствора гидроокиси натрия 1 водой до 1000 .

Раствор соляной кислоты (HCI) 0,325 : разбавляют 325 концентрированной соляной кислоты 1 дистиллированной водой до 1000 .

Ацетон по ГОСТ 2603.

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

6 Средства измерений и оборудование

Весы лабораторные по ГОСТ Р 53228.

Фильтры бумажные обеззоленные диаметром 15 см по ГОСТ 12026.

Шкаф сушильный, обеспечивающий температуру от 60°С до 110°С.

Эксикатор по ГОСТ 25336.

Стаканы химические вместимостью 400 по ГОСТ 25336.

Баня водяная с терморегулятором для поддержания температуры ( )°С, оборудованная качалкой или магнитной мешалкой.

рН-метр с погрешностью измерения не более 0,1 ед. рН.

Дозаторы пипеточные с объемом доз 0,05 и 0,5 .

Цилиндры мерные вместимостью 50 и 500 по ГОСТ 1770.

Насос водоструйный стеклянный лабораторный по ГОСТ 25336.

Печь муфельная с терморегулятором для поддержания температуры ( )°С.

Фольга алюминиевая.

Мельница лабораторная или ступка.

Допускается использование других средств измерений с метрологическими характеристиками и лабораторного оборудования с техническими характеристиками, не уступающими перечисленным выше.

7 Отбор и подготовка проб

Отбор и подготовка проб - по ГОСТ 26313, 26671 и 26809.

8 Подготовка к испытанию

При необходимости пробу измельчают в гомогенизаторе или лабораторной мельнице. Если содержание жира в пробе превышает 5%, его экстрагируют петролейным эфиром из расчета 25 на 1 г пробы. Обезжиренный образец высушивают в сушильном шкафу в течение одного часа при температуре 70°С и помещают в эксикатор.

9 Проведение испытания

При проведении испытания избегают загрязнений, связанных с поглощением пробой дополнительной влаги.

9.1 Берут две навески пробы массой 1 г (с точностью до 0,0001 г) в стеклянные стаканы вместимостью 400 и добавляют в каждый по 50 фосфатного буфера рН 6,0.

9.2 Испытание

9.2.1 С помощью пипеточного дозатора в каждый стакан вносят по 0,05 раствора термостабильной -амилазы по [1].

Содержимое перемешивают, слегка вращая стаканы, после чего стаканы закрывают алюминиевой фольгой и помещают в кипящую водяную баню. Время выдержки 30 мин отсчитывают с момента, когда содержимое нагреется до температуры 90°С. Затем смесь охлаждают до температуры 20°С и доводят значение рН до 7,4 - 7,6 раствором гидроокиси натрия молярной концентрации 0,275 .

9.2.2 В каждый стакан вносят 0,05 раствора протеазы по [1] с помощью пипеточного дозатора. Содержимое стаканов перемешивают и закрывают алюминиевой фольгой, выдерживают на водяной бане при температуре 60°С в течение 30 мин при постоянном перемешивании, охлаждают до 20°С и доводят значение рН до 4,3 - 4,7 с помощью раствора соляной кислоты 0,325 .

9.2.3 Затем в каждый стакан с помощью пипеточного дозатора вносят 0,150 раствора амилоглюкозидазы по [1], выдерживают на водяной бане при температуре 60°С в течение 30 мин, отсчитывая время с момента, когда температура содержимого стаканов достигнет 60°С.

9.2.4 Мерным цилиндром отмеряют 280 этилового спирта 78% об., подогревают его до температуры 60°С, добавляют к содержимому стаканов и выдерживают при комнатной температуре в течение 60 мин для формирования осадка.

9.2.5 Высушенные при температуре 60°С до постоянной массы (разница между взвешиваниями не должна превышать 0,001 г) и взвешенные (с точностью до 0,0001 г) бумажные фильтры помещают в стеклянные воронки и смачивают этиловым спиртом 95% об., осадок, содержащий пищевые волокна, фильтруют количественно, смывая со стенок стаканов порциями этилового спирта, затем осадок на фильтре промывают три раза порциями этилового спирта 78% об. по 20 , два раза порциями этилового спирта 95% об. по 10 и два раза порциями ацетона по 10 .

9.2.6 Осадки на фильтрах высушивают при температуре 105°С в сушильном шкафу до постоянной массы (разница между взвешиваниями не должна превышать 0,001 г). Фильтры охлаждают в эксикаторе и взвешивают с точностью до 0,0001 г.

9.2.7 В одном из двух осадков определяют содержание азота методом Кьельдаля по ГОСТ 26889. Полученное значение умножают на 6,25, получая содержание белка. Во втором осадке в зависимости от вида функционального пищевого продукта определяют содержание золы по ГОСТ 5901, ГОСТ 15113.8, ГОСТ 25555.4 или ГОСТ Р 51418.

9.3 Число параллельных определений

Выполняют два независимых определения в двух различных пробах одного и того же образца.

10 Обработка результатов

Общую массовую долю пищевых волокон X, %, от массы обезжиренного сухого вещества вычисляют по формуле

,

(1)

где - масса навески сухой обезжиренной пробы, г;

- масса осадка, г;

- массовая доля белка в осадке, % (ГОСТ 26889), вычисляемая по формуле

;