6.2.1 Колбы и бактериологические пробирки (16х160 мм и 20х200 мм).
Допускается использовать флаконы с завинчивающимися пробками аналогичной вместимости.
6.2.2 Градуированные пипетки, откалиброванные для бактериологических целей, вместимостью 1,0 и 10,0 см с ценой деления соответственно 0,1 и 1 см и диаметром выходного отверстия 2-3 мм.
6.3 Стерилизация стеклянной посуды
Стерилизуют стеклянную посуду одним из следующих способов:
влажная стерилизация при температуре (121±1) °С не менее 20 мин;
сухая стерилизация при температуре не менее 170 °С в течение 1 ч.
7 Отбор проб
Пробу отбирают массой не менее 200 г по ГОСТ Р 51447.
Отобранную пробу можно хранить в лаборатории при температуре 0-5 °С не более 1 ч.
8 Проведение анализа
8.1 Предварительная обработка проб
Пробу дважды пропускают через мясорубку, перемешивают и сразу приступают к анализу. При необходимости пробу можно хранить при температуре 0-5 °С не более 1 ч.
8.2 Навеска
Приблизительно 10 г измельченной пробы взвешивают с точностью 0,1 г в стерильном смесительном стакане.
8.3 Приготовление гомогената и разведений
8.3.1 Для приготовления гомогената (исходного разведения) к навеске продукта добавляют жидкость для разбавления в соотношении 1:9 (по массе) и гомогенизируют на смесителе не более 2,5 мин, при этом число оборотов смесителя должно составлять 15000-20000.
8.3.2 Последующие операции (8.3.3-8.3.5) выполняют одновременно на двух параллельных порциях гомогената (две серии разведений).
8.3.3 Непосредственно после гомогенизации стерильной пипеткой вместимостью 1 см берут 1 см3гомогената и добавляют его в пробирку, содержащую 9 см3 стерильной жидкости для разбавления, не касаясь пипеткой поверхности раствора.
8.3.4 Жидкости хорошо перемешивают новой стерильной пипеткой путем десятикратного наполнения и выдувания из нее содержимого пробирки. Переносят этой же пипеткой 1 см3 полученного раствора (разведение 10-2) в другую пробирку, содержащую 9 см3 стерильной жидкости для разбавления, не касаясь пипеткой поверхности раствора.
8.3.5 Жидкости хорошо перемешивают новой стерильной пипеткой. Операции повторяют до тех пор, пока не получат разведение 10-6.
8.4 Предполагаемые колиформные бактерии
8.4.1 Посев
Переносят новой стерильной пипеткой 6 порций по 1 см3гомогената (разделяя их на две трехкратные повторности) и в трехкратной повторности по 1 см3 каждого из пяти последующих разведений (8.3.3-8.3.5) двух серий разведений в пробирки, содержащие по 10 см3 селективного бульона одинарной концентрации (5.2.1б); начинают посев с наибольшего разведения гомогената и постепенно переходят к наименьшему, предварительно перемешивая содержимое пробирок трехкратным наполнением и выдуванием пипетки.
Если ожидается выявить очень маленькое количество колиформных бактерий, то таким же образом переносят 6 порций по 10 см3гомогената (две трехкратные повторности) в пробирки с 10 см3 селективного бульона двойной концентрации (5.2.1а), используя стерильную пипетку вместимостью 10 см3.
8.4.2 Инкубирование
Пробирки, приготовленные по 8.4.1, выдерживают в термостате при температуре (30±1) °С в течение (48±2) ч.
8.4.3 Интерпретация результатов
После выдерживания в термостате пробирки с посевом просматривают и отмечают положительные, то есть те, в которых наблюдается рост и образование газа, заполнившего не менее 1/10 объема трубки Дархема.
8.5 ПредполагаемыеEscherichiacoli
8.5.1 Посев
Используя стерильную пипетку вместимостью 1 см3 для каждой пробирки, делают посев 1 капли культуры из положительных пробирок с предполагаемыми колиформными бактериями (8.4.3) в пробирку с 10 см3 бульона одинарной концентрации (5.2.1б) и в пробирку с 10 см3триптоновой воды, предварительно подогревая среды до 44 °С.
8.5.2 Инкубирование
Пробирки, приготовленные по п.8.5.1, выдерживают на водяной бане при температуре (44±0,1) °Св течение 48 ч.
8.5.3 Интерпретация результатов
8.5.3.1 Образование газа
Пробирки, содержащие бульон с посевом, после инкубирования в течение 48 ч просматривают.
Регистрируют как положительные те пробирки, в которых наблюдается рост и образование газа, заполнившего не менее 1/10 объема трубки Дархема.
8.5.3.2 Образование индола
В пробирки, содержащие триптоновую воду с посевом, после инкубирования в течение 48 ч добавляют 0,5 см3индольного реактива, хорошо встряхивают и исследуют по истечении 1 мин.
Красное окрашивание спиртового слоя указывает на присутствие индола.
Регистрируют как положительные те пробирки, в которых образовался индол.
9 Обработка результатов
9.1 Предполагаемые колиформные бактерии
9.1.1 По количеству положительных пробирок с предполагаемыми колиформными бактериями (8.4.3) для различных разведений рассчитывают наиболее вероятное число (НВЧ) этих микроорганизмов на 1 г мяса или мясного продукта, как указано в 9.1.2-9.1.4.
9.1.2 Для расчета НВЧ выбирают три последовательных разведения в соответствии с одним из следующих правил:
а) когда есть разведение, дающее три положительные пробирки, выбирают наибольшее разведение (наименьшей концентрации), дающее три положительные пробирки, и два последующих разведения (концентрацией 1/10 и 1/100 выбранного разведения).
Если последующие разведения оказались недостаточными в сравнении с наибольшим, дающим три положительные пробирки, выбирают три наибольших разведения серии;
б) когда нет разведения, дающего три положительные пробирки, выбирают три наибольших разведения серии;
в) особый случай - когда более одного из трех разведений, выбранных по правилам, указанным в подпунктах 
и 
, не дали положительных пробирок.
и , не дали положительных пробирок.