1 см
исследуемого разведения вносят в пробирку с питательной средой. Посевы выращивают в термостате при температуре 43 °С. Отсутствие через 18-20 ч инкубации газообразования и изменения цвета питательной среды дает окончательный отрицательный ответ в отношении бактерий группы кишечной палочки. При изменении цвета среды от желтоватого до интенсивного розового проводят подтверждающий высев на твердую дифференциальную среду Эндо. Чашки с посевом помещают в термостат на 24 ч при температуре 37 °С. Из типично окрашенных и белых колоний делают мазки и окрашивают по Грамму. Наличие в мазках граммотрицательных, коротких, непосредственных палочек подтверждает положительный ответ на присутствие микробов группы кишечной палочки. Результаты исследований выражают коли-титром и коли-индексом.
исследуемого разведения вносят в пробирку с питательной средой. Посевы выращивают в термостате при температуре 43 °С. Отсутствие через 18-20 ч инкубации газообразования и изменения цвета питательной среды дает окончательный отрицательный ответ в отношении бактерий группы кишечной палочки. При изменении цвета среды от желтоватого до интенсивного розового проводят подтверждающий высев на твердую дифференциальную среду Эндо. Чашки с посевом помещают в термостат на 24 ч при температуре 37 °С. Из типично окрашенных и белых колоний делают мазки и окрашивают по Грамму. Наличие в мазках граммотрицательных, коротких, непосредственных палочек подтверждает положительный ответ на присутствие микробов группы кишечной палочки. Результаты исследований выражают коли-титром и коли-индексом.
. (Ж.1)Приложение И
(рекомендуемое)
Метод гельминтологического исследования жидкого навоза
Яйца гельминтов выделяют из жидкости путем коагулирования с последующим отделением от осадка раствором 3%-ной соляной кислоты и насыщенным раствором азотнокислого калия.
В качестве коагулянта используют 0,12%-ный раствор сернокислой меди.
Проведение анализа
В стеклянный цилиндр вместимостью 1500 см наливают 1000 см исследуемой пробы и добавляют 0,6 г сернокислой меди. Жидкость тщательно размешивают и дают отстояться в течение 60 мин, после чего надосадочную жидкость сливают, а остаток переносят в центрифужные пробирки и центрифугируют в течение 3 мин при частоте вращения 66,6 об/мин. Жидкость сливают, а к осадку добавляют 4 см 3%-ного раствора соляной кислоты и тщательно перемешивают до получения гомогенной массы. Смесь повторно центрифугируют, надосадочную жидкость сливают, а к осадку добавляют насыщенный раствор азотнокислого калия (
1,39), размешивают стеклянной палочкой и центрифугируют в течение 3 мин при частоте вращения 10-13,3 с
.
наливают 1000 см исследуемой пробы и добавляют 0,6 г сернокислой меди. Жидкость тщательно размешивают и дают отстояться в течение 60 мин, после чего надосадочную жидкость сливают, а остаток переносят в центрифужные пробирки и центрифугируют в течение 3 мин при частоте вращения 66,6 об/мин. Жидкость сливают, а к осадку добавляют 4 см 3%-ного раствора соляной кислоты и тщательно перемешивают до получения гомогенной массы. Смесь повторно центрифугируют, надосадочную жидкость сливают, а к осадку добавляют насыщенный раствор азотнокислого калия ( 1,39), размешивают стеклянной палочкой и центрифугируют в течение 3 мин при частоте вращения 10-13,3 с . После центрифугирования пробирки с осадком ставят в штатив, заливают раствором азотнокислого калия до образования выпуклого мениска и накрывают покровными стеклами, предварительно обезжиренными смесью спирта с эфиром (1:2). Отстаивают в течение 25 мин.
Затем снимают предметные стекла и просматривают их под микроскопом.
Количество яиц выражают в единицах на 1 дм жидкости.
жидкости. Выживаемость яиц гельминтов определяют следующим образом.
Предметные стекла с прикрепленными к ним яйцами гельминтов помещают во влажные камеры (чашки Петри) с фильтровальной бумагой, постоянно увлажненной жидкостью Барбагалло и ставят в термостат при температуре 27 °С - 30 °С. Наблюдения ведут в течение 1-го месяца, просматривая препараты под микроскопом. Под большим увеличением микроскопа (600 крат) выявляют резко выраженные признаки гибели яиц: деформацию оболочек, вакуолизацию плазмы зародыша, прогибания оболочки внутрь, разрушение, смещение плазмы зародыша к одному полюсу.
Помимо световой микроскопии можно применять метод окрашивания. Применяют метиленовый синий краситель (метиленового синего 0,05 г, едкого натрия - 0,5 г, молочной кислоты - 15 см ). Зародыши погибших яиц аскарид окрашиваются в синий цвет, а жизнеспособные окраску не воспринимают.
). Зародыши погибших яиц аскарид окрашиваются в синий цвет, а жизнеспособные окраску не воспринимают. Определение содержания яиц гельминтов в твердой фракции навоза проводят с помощью метода, который заключается в следующем: 25 г твердой фракции навоза вносят в центрифужную пробирку вместимостью 125 см , доливают 75 см водопроводной воды. Смесь перемешивают до образования гомогенной массы.
, доливают 75 см водопроводной воды. Смесь перемешивают до образования гомогенной массы. Всплывшие частицы сразу же удаляют. Затем смесь центрифугируют в течение 3 мин при частоте вращения 600-800 с , после чего воду сливают, а к осадку добавляют 75 см
насыщенного раствора соли азотнокислого натрия (NaNO
) ( 1,39), тщательно перемешивают и повторно центрифугируют в течение 3 мин.
, после чего воду сливают, а к осадку добавляют 75 см насыщенного раствора соли азотнокислого натрия (NaNO ) ( 1,39), тщательно перемешивают и повторно центрифугируют в течение 3 мин. После центрифугирования пробирки со смесью ставят в штатив и осторожно добавляют раствор насыщенного азотнокислого натрия до образования выпуклого мениска. Затем пробирки закрывают предметными стеклами и ставят на 30 мин. В течение этого времени яйца гельминтов всплывают и прикрепляются к нижней поверхности стекол. Через 30 мин стекла снимают, а на их месте помещают другие на такое же время.
На снятые стекла наносят несколько капель 50%-ного глицерина, накрывают покровными стеклами, просматривают под микроскопом при малом увеличении. То же самое повторяют и со второй партией стекол. Таким образом выявляют до 42%-48% всех присутствующих в образцах яиц гельминтов.
Приложение К
(рекомендуемое)
Методы определения наличия семян сорняков и их выживаемость в навозе
К.1 Метод определения наличия семян сорняков
К.1.1 Из средней смешанной пробы отбирают навеску объемом 200 см и переносят в комплект сит с размерами 3; 1; 0,5; 0,25 мм, последовательно вставленных одно в другое, и проводят отмывку в воде, которую по мере загрязнения меняют. По окончании отмывки твердые частицы, оставшиеся на ситах, переносят на плотную бумагу и сушат до воздушно-сухого состояния.
и переносят в комплект сит с размерами 3; 1; 0,5; 0,25 мм, последовательно вставленных одно в другое, и проводят отмывку в воде, которую по мере загрязнения меняют. По окончании отмывки твердые частицы, оставшиеся на ситах, переносят на плотную бумагу и сушат до воздушно-сухого состояния. Высушенный образец просеивают через те же сита, на которых проводили отмывку.
К.1.2 Семена сорняков отделяют от сухих остатков навоза отдельно от каждой фракции на ситах. Учитывают только целые семена. Определяют общее количество семян сорных растений.
К.2 Определение всхожести семян сорных растений
К.2.1 Всхожесть и жизнеспособность определяют только для тех видов сорняков, количество семян которых в анализируемой навеске составляет не менее 20 шт. Для других видов сорняков условно принимается, что всхожесть семян равна 10%.
К.2.2 Семена сорных растений, выделенных из жидкого навоза, проращивают в аппарате Якобсона или в термостатах с регулируемой температурой. Семена укладывают в чашки Петри по 100 шт. в четырехкратной повторности на увлажненную фильтровальную бумагу. Чтобы семена не были полностью погружены в воду, фильтровальную бумагу укладывают на 1-2 предметных стекла или влажный слой песка. В каждую чашку помещают не более 100 шт. семян. Раскладывают их по всей поверхности фильтровальной бумаги.
По мере появления проросших семян их количество учитывают и удаляют. Через 5 сут непроросшие семена переносят на новый слой фильтровальной бумаги и продолжают проращивать до 15 сут. Крупные семена сорных растений проращивают в песке.
Всхожесть семян сорняков, %, вычисляют по количеству проросших семян (форма К.1).
Форма К.1 - Динамика всхожести семян сорных растений
 | |
| 623 × 648 пикс. Открыть в новом окне | |
К.3 Оценка содержания семян сорных растений в жидком навозе
К.3.1 Оценку засоренности проводят по четырехбалльной шкале. По количеству всхожих семян сорняков с использованием данных таблицы К.1 устанавливают степень засоренности. Результаты оценки засоренности записывают в форму К.2.
Таблица К.1 - Шкала оценки по запасам всхожести семян сорняков
 | |
| 611 × 757 пикс. Открыть в новом окне | |
Форма К.2 - Результаты анализа засоренности органических удобрений хозяйства
 | |
| 637 × 739 пикс. Открыть в новом окне | |
К.3.2 Многократные анализы навоза, компостов и других удобрений показывают, что всхожесть семян основных видов сорняков составляет от 10% до 30%. Поэтому в отдельных случаях допускается оценка органических удобрений по общему запасу семян. Для этого может быть использована предложенная шкала (таблица К.1). При этом полученный результат анализов необходимо разделить на 10.
Пример - В 1 т подстилочного навоза содержится 5,1 млн. семян сорняков. Для оценки качества такого навоза по предлагаемой шкале 5,1 млн. разделить на 10, получим 510 тысяч. Содержание семян сорных растений в таком навозе оценивается в 3 балла (высокий запас семян). Следовательно, внесение такого навоза в почву создает сильную засоренность посевов.
Приложение Л
(рекомендуемое)
Перечень средств измерений и оборудования для определения функциональных показателей
Рулетка длиной 10 м с погрешностью измерений ±1 см по ГОСТ 7502.
Газоанализатор с погрешностью измерений ±10% по ГОСТ 17.2.6.02.
Динамометр с диапазоном измерений от 0 до 200 кг и от 0 до 300 кг с погрешностью измерений ±1 кг по ГОСТ 13837.
Весы с погрешностью измерений ±10 мг по ГОСТ 24104.
Весы медицинские с погрешностью измерений ±40 г по ГОСТ 29329.
Секундомер с погрешностью измерений ±1 с.