m) чашки Петри инкубируются при комнатной температуре и через соответствующий период времени осматриваются (В.3). В центре и на внешнем крае поверхности агаровой питательной среды колониеобразующие единицы должны отсутствовать.
Примечание. Линия "старт/финиш" может содержать "дополнительные" колонии.
n) ручка активации держателя чашки передвигается и микропереключатель переводится в другую стартовую позицию;
о) внутренние поверхности щелевого пробоотборника протираются дезинфицирующим средством и закрываются крышкой;
р) для следующего отбора пробы приведенные действия повторяются.
Следует контролировать условия транспортирования чашек Петри от производителя, наполнившего их агаровой питательной средой, до места отбора пробы в лаборатории на предмет возможного загрязнения чашек при транспортировании. Чашки Петри после транспортирования не должны показывать роста микроорганизмов.
В.3. Инкубация загрязняющих жизнеспособных микроорганизмов
Наиболее подходящей температурой инкубации микроорганизмов в общем случае является температура окружающей среды, в которой они находились до отбора проб. Мезофильные бактерии или грибы культивируются при температуре от 20 °С до 30 °С. Для некоторых термочувствительных бактерий могут потребоваться другие температуры инкубации. Период инкубации обычно составляет для грибов 14 сут., для мезофильных бактерий - от 2 до 14 сут. Возможны и другие температуры инкубации микроорганизмов.
Для выделения отдельных видов бактерий (например, грамм-отрицательных энтеробактерий) могут использоваться селективные среды (агаровые питательные). Число колониеобразующих единиц подсчитывается через заданный период времени (например 24 ч).
В.4. Подсчет колониеобразующих единиц (КОЕ)
Неселективные среды анализируются на наличие роста колониеобразующих единиц, начиная с 24 ч после начала инкубации, с повторным подсчетом колоний каждые 24 ч в течение 14 сут. Для предотвращения неопределенности измерений при инкубации следует проводить регулярные наблюдения и подсчет колоний по мере их выявления и с учетом возможности перерастания.
Приложение С Отбор проб на эндотоксины
Приложение С
(справочное)
ОТБОР ПРОБ НА ЭНДОТОКСИНЫ
С.1. Общие положения
Отбор проб сжатого воздуха на эндотоксины является сложным процессом, требующим неиспользованных ранее пластиковых трубок и стеклянных флаконов, а также персонала, обученного методам отбора проб. Наличие эндотоксинов в сжатом воздухе подтверждается после подсчета количества грамм-отрицательных энтеробактерий в конденсате сжатого воздуха и дополнительных измерений содержания бактерий, грибов и дрожжей.
С.2. Методика отбора проб
Примечание. Содержание в сжатом воздухе всего нескольких нанограмм эндотоксинов (продуктов метаболизма грамм-отрицательных бактерий) может вызвать заболевание.
Испытания следует проводить в стерильных условиях с применением пластины с соответствующей агаровой средой. Точки отбора проб в системе сжатого воздуха выбираются в местах, удобных для сбора конденсата. Для подсчета количества грамм-отрицательных бактерий в конденсате используется следующая методика:
a) непосредственно перед испытанием точки отбора пробы дезинфицируются 70%-ным этиловым спиртом;
b) с флакона с агаровой питательной средой снимается крышка с прикрепленной к ней пластиной;
c) из точки отбора пробы конденсат отбирается в стерильный флакон;
d) прикрепленная к крышке флакона пластина вводится в отобранный конденсат на 10 с. Обе поверхности (пластины и конденсата) должны контактировать;
e) пластина медленно (примерно за 3 с) извлекается из конденсата;
f) содержимое флакона выливается;
g) после инокуляции пластина вновь помещается во флакон. На этой стадии флакон с пластиной может храниться или транспортироваться в течение нескольких часов, что не влияет на результат. Флакон с испытуемой пластиной не допускается замораживать;
h) пластины инкубируются при 27 °С в течение 14 сут. При медленном росте микроорганизмов период инкубации продлевается до 1 мес.;
i) после инкубации пластина из флакона осторожно удаляется. Рост колоний анализируется и проводятся реакции на изменение цвета по инструкциям производителей.
Приемлемый уровень бактерий, дрожжей и грибов в конденсате, как правило, составляет 10000 КОЕ/мл. При обнаружении одной грамм-отрицательной бактерии считается, что в сжатом воздухе присутствуют эндотоксины и, следовательно, влажные детали установки следует очистить и продезинфицировать.
Приложение D Подготовка чашек Петри с питательной средой
Приложение D
(справочное)
ПОДГОТОВКА ЧАШЕК ПЕТРИ С ПИТАТЕЛЬНОЙ СРЕДОЙ
Методика применима к агаровой питательной среде, используемой для подсчета колоний, и среде Сабуро с 4%-ной декстрозой.
Методика включает в себя следующие действия:
a) питательная среда в количестве, указанном производителем, взвешивается и растворяется в воде;
b) питательная среда стерилизуется в автоклаве при температуре 121 °С в течение 15 мин.;
c) после охлаждения до 50 °С измеряется рН среды, который при необходимости доводится до заданного значения с использованием соляной кислоты или щелочи натрия;
d) на каждую стерильную чашку Петри диаметром 140 мм наносится по 65 мл питательной среды;
e) после остывания и затвердения среды каждая чашка Петри упаковывается в два стерильных пластиковых пакета:
1) первый пакет закрывается простой двусторонней круговой пломбой,
2) второй пакет герметично укупоривается с запайкой краев;
f) пакеты с чашками маркируются с указанием даты, содержимого и номера серии.
Приложение Е Сведения о соответствии национальных стандартов Российской Федерации ссылочным международным (региональным) стандартам
Приложение Е
(справочное)
СВЕДЕНИЯ О СООТВЕТСТВИИ НАЦИОНАЛЬНЫХ СТАНДАРТОВ
РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ ССЫЛОЧНЫМ МЕЖДУНАРОДНЫМ
(РЕГИОНАЛЬНЫМ) СТАНДАРТАМ