Для более легкого разделения частиц, содержащих и не содержащих микроорганизмы, контроль следует проводить в течение 4 ч.
При контроле, для получения достоверных результатов по количеству и размерам частиц, следует устранить влияние на них воды и других жидкостей.
Влияние воды на получение результатов следует устранять путем нагревания или сушки воздуха (что в других случаях может быть приемлемым), так как наличие ее может оказать отрицательное воздействие на жизнеспособность микроорганизмов.
5. Рабочие условия
Фактические рабочие условия должны быть приведены в аналитическом отчете о контроле содержания жизнеспособных микробиологических частиц в сжатом воздухе (Приложение А).
6. Контроль наличия жизнеспособных колониеобразующих микроорганизмов
После инкубации пробы воздуха на агаровой питательной среде (В.3) поверхность среды визуально исследуется на наличие жизнеспособных колониеобразующих микроорганизмов.
7. Заключение в аналитическом отчете
В аналитическом отчете о контроле содержания твердых частиц в соответствии с ИСО 8573-4 дополнительно следует привести заключение о наличии частиц, содержащих жизнеспособные колониеобразующие микроорганизмы, твердых частиц и слова "Стерильность сжатого воздуха декларируется в соответствии с ИСО 8573-1" с указанием:
- "стерильный" или "нестерильный";
- даты отбора пробы;
- даты контроля;
- точек отбора проб.
В Приложении А приведена форма аналитического отчета о контроле содержания жизнеспособных микробиологических частиц в сжатом воздухе.
Приложение А Аналитический отчет. контроль содержания жизнеспособных микробиологических частиц в сжатом воздухе
Приложение А
(справочное)
АНАЛИТИЧЕСКИЙ ОТЧЕТ. КОНТРОЛЬ СОДЕРЖАНИЯ ЖИЗНЕСПОСОБНЫХ
МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИХ ЧАСТИЦ В СЖАТОМ ВОЗДУХЕ
После контроля содержания твердых частиц в пробе, отобранной из системы сжатого воздуха в соответствии с ИСО 8573-4, оформляется аналитический отчет в виде таблицы А.1 с данными о количестве частиц, на которых присутствуют жизнеспособные микробиологические колониеобразующие единицы (КОЕ).
Примечание. Сведения об агаровой питательной среде приведены в В.3.
Таблица А.1
ФОРМА АНАЛИТИЧЕСКОГО ОТЧЕТА О КОНТРОЛЕ СОДЕРЖАНИЯ
ЖИЗНЕСПОСОБНЫХ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИХ ЧАСТИЦ
В ПРОБЕ СЖАТОГО ВОЗДУХА
| Действительная и средняя величины | |
| Микроорганизм | КОЕ/куб. м при стандартных условиях |
| Бактерии | 100 |
| Дрожжи | 14 |
| Грибы | Не обнаружено |
| Эндобактерии | 50 |
| Давление, при котором проводился контроль | МПа [бар(е)] |
| Заявление относительно возможности применения (раздел 7) | |
| Дата протокола калибровки | год/месяц/день |
| Стандартные условия: - температура ... 20 °С; - давление ... 0,1 МПа (1 бар). В данном применении относительная влажность не оказывает влияния на объем. | |
Приложение В Количественный метод отбора проб
Приложение В
(рекомендуемое)
КОЛИЧЕСТВЕННЫЙ МЕТОД ОТБОРА ПРОБ
В.1. Отбор проб с использованием щелевого пробоотборника
В.1.1. Принцип отбора проб
Механизм захвата микроорганизмов с использованием щелевого пробоотборника (импактора для анализа воздуха) характеризуется простотой и надежностью. Воздух из установки сжатого воздуха проходит через специально сконструированный переходник и ускоряется при поступлении через узкую щель к влажной поверхности агаровой питательной среды (рисунок 1 - не приводится). Согласно закону инерции микроорганизмы (как более тяжелые) оседают на поверхность среды, а молекулы воздуха отклоняются от нее. При соответствующих условиях инкубации микроорганизмы вырастают в колонии, которые подсчитываются в предположении, что один микроорганизм вырастает в одну колонию.
Щелевой пробоотборник используется для бактерий, дрожжей или грибов; для вирусов и бактериофагов применяются специальные методы отбора проб. Поскольку оседание частиц происходит на большую поверхность агаровой питательной среды в чашке Петри диаметром 140 мм и пробоотборник расположен радиально относительно вращающейся чашки, то может быть подсчитано большее число микроорганизмов.
В.1.2. Методы работы в асептических условиях
Метод отбора проб предусматривает работу в асептических условиях. В качестве дезинфицирующего средства рекомендуется использование 70%-ного этилового спирта. Во время простоя пробоотборника следует принимать меры, ограничивающие рост микроорганизмов. Все операции, связанные с открытием щели, должны проводиться в минимальные сроки, чтобы избежать возможности попадания загрязнений из непосредственного окружения. Должны приниматься меры, исключающие сквозняки.
В.2. Методика отбора проб
Для отбора проб следует применять следующую методику:
a) оборудование, используемое для отбора проб, в т.ч. трубки и шланги, непосредственно перед использованием стерилизуется дезинфицирующим средством;
b) испытуемая проба воздуха пропускается через пробоотборник и соединенные с ним трубки и шланги (без чашки Петри с агаровой питательной средой). Это необходимо для испарения дезинфицирующего средства и настройки щелевого пробоотборника;
c) путем выполнения процедур по перечислениям d) - f) (при выключенном пробоотборнике) до и после контроля проводится "слепое испытание". Используемые при этом чашки Петри диаметром 140 мм, наполненные агаровой питательной средой, не должны показывать роста микроорганизмов;
d) на дне чашки Петри снаружи закрепляется этикетка с информацией о дате и начале испытания, адресе места проведения испытания, коде и т.д. Отмечается начальная позиция и направление вращения;
e) проверяется, что индикатор уровня и крышка в щелевом пробоотборнике для входа воздуха открыты. При открытой крышке проверяется правильность расположения держателя пластины и микропереключателя. Внутренние поверхности пробоотборника протираются дезинфицирующим средством;
f) чашка Петри вставляется в щелевой пробоотборник таким образом, чтобы ее радиус располагался вертикально под щелью для поступления воздуха. Крышка чашки Петри снимается и помещается в стерильный пластиковый пакет;
g) после снятия крышки чашки Петри крышка щелевого пробоотборника возвращается в исходное положение;
h) освобождается индикатор уровня и осторожно опускается к поверхности агаровой питательной среды. Крышка щелевого пробоотборника для входа воздуха опускается так, чтобы индикаторная стрелка указывала на нижний край направляющего желоба. Индикатор уровня пробоотборника возвращается в верхнюю позицию и закрепляется;
i) после нажатия клавиши "старт" начинается автоматический отбор пробы. Отмечается время начала и продолжительность отбора пробы, наименование и размещение испытательного оборудования и другие условия или явления, которые могут повлиять на результаты контроля;
j) отбор пробы завершается при выключении индикаторной лампы. При выключенной клавише "старт/стоп" поднимается крышка для входа воздуха;
k) крышка щелевого пробоотборника освобождается и осторожно сдвигается с одновременным извлечением крышки чашки Петри из стерильного пластикового пакета для последующего закрытия чашки Петри. Такие действия проводятся осторожно, чтобы не повредить агаровую питательную среду с пробой сжатого воздуха;
l) чашка Петри извлекается из пробоотборника, закрывается крышкой, заклеивается лентой и помещается в стерильный пакет, который также заклеивается;