Food-stuffs. Methods for detection and determination of Escherichia coli
Дата введения 1 июля 2002 г.
Введен впервые
Введен впервые
1 Область применения
Настоящий стандарт распространяется на пищевые продукты и устанавливает метод выявления в определенной навеске пищевого продукта бактерий вида Excherichia coli (E.coli) и три метода определения их количества: метод наиболее вероятного числа (НВЧ) и методы посева в или на агаризованные селективно-диагностические среды.
Выбор метода определения количества E.coli зависит от предполагаемой обсемененности продукта бактериями семейства Enterobacteriaceae и осуществляется в соответствии с требованиями ГОСТ 30518.
2 Нормативные ссылки
В настоящем стандарте использованы ссылки на следующие стандарты:
ГОСТ 9284-75 Стекла предметные для микропрепаратов. Технические условия
ГОСТ 10444.1-84 Консервы. Приготовление растворов реактивов, красок, индикаторов и питательных сред, применяемых в микробиологическом анализе
ГОСТ 24104-88 Весы лабораторные общего назначения и образцовые. Общие технические условия
ГОСТ 26668-85 Продукты пищевые и вкусовые. Методы отбора проб для микробиологических анализов
ГОСТ 26669-85 Продукты пищевые и вкусовые. Подготовка проб для микробиологических анализов
ГОСТ 26670-91 Продукты пищевые. Методы культивирования микроорганизмов
ГОСТ 29184-91 Продукты пищевые. Методы выявления и определения количества бактерий семейства Enterobacteriaceae
ГОСТ 30425-97 Консервы. Метод определения промышленной стерильности
ГОСТ 30518-97/Р 50474-93 Продукты пищевые. Методы выявления и определения количества бактерий группы кишечных палочек (колиформных бактерий)
ГОСТ 30519-97/Р 50480-93 Продукты пищевые. Метод выявления бактерий рода Salmonella
3 Сущность методов
Методы выявления и определения НВЧ E.Coli основаны на высеве определенного количества продукта и (или) разведений навески продукта в жидкую селективную среду с лактозой, инкубировании посевов, учете положительных колб (пробирок), пересеве культуральной жидкости на поверхность агаризованной селективно-диагностической среды для дальнейшего подтверждения по биохимическим и культуральным признакам роста принадлежности выделенных колоний к E.coli.
Методы определения количества E.coli посевом в или на агаризованные селективно-диагностические среды основаны на высеве определенного количества продукта или его разведений в или на агаризованную селективно-диагностическую среду, инкубировании посевов, подсчете типичных для E.coli колоний, подтверждении по биохимическим и культуральным признакам роста принадлежности выделенных колоний к E.coli.
4 Отбор и подготовка проб
Отбор и подготовка проб - по ГОСТ 26668, ГОСТ 26669.
5 Аппаратура, материалы, реактивы (в т.ч. индикаторы)
Для проведения анализа применяют аппаратуру, материалы и реактивы по ГОСТ 10444.1 со следующими дополнениями:
весы лабораторные общего назначения по ГОСТ 24104 с наибольшим пределом взвешивания до 1 кг и допустимой погрешностью 
мг (для взвешивания продукта) и весы с наибольшим пределом взвешивания 200 г, 2-го класса точности (для взвешивания реактивов);
мг (для взвешивания продукта) и весы с наибольшим пределом взвешивания 200 г, 2-го класса точности (для взвешивания реактивов); микроскоп биологический с приспособлением для фазово-контрастного микроскопирования, обеспечивающий увеличение 
;
; петлю бактериологическую;
поплавки (трубки Дархема);
стекла предметные по ГОСТ 9284;
термостаты с диапазоном рабочих температур 28-55°С, позволяющие поддерживать заданную температуру с допустимой погрешностью 
°С;
°С; бриллиантовый зеленый;
генцианвиолет;
желчь говяжью сухую или натуральную;
магний сернокислый;
метиловый красный;
метиловый фиолетовый;
натрий-аммоний фосфорнокислый двузамещенный;
сорбит;
феноловый красный;
целлобиоза.
6 Подготовка к анализу
6.1 Приготовление растворов реактивов
6.1.1 Реактив Кларка: 0,1 г метилового красного растворяют в 300 
этилового спирта и добавляют 200 
дистиллированной воды. Реактив хранят в посуде из темного стекла не более 1 мес при температуре (
)°С.
этилового спирта и добавляют 200 дистиллированной воды. Реактив хранят в посуде из темного стекла не более 1 мес при температуре ( )°С. 6.1.2 Реактивы Ковача и Эрлиха готовят по ГОСТ 30519.
6.1.3 Спиртовой раствор 
готовят по ГОСТ 30519.
готовят по ГОСТ 30519. 6.1.4 Приготовление индикаторных бумажек для обнаружения индола: 3-5 г парадиметиламинобензальдегида, 10 
концентрированной фосфорной кислоты и 50 
этилового спирта тщательно перемешивают в фарфоровой ступке. В полученном растворе смачивают полоски фильтровальной бумаги, высушивают и нарезают узкими полосками шириной около 1 см. Цвет полученных бумажек - желтый. Индикаторные бумажки хранят не более 1 мес в темном месте.
концентрированной фосфорной кислоты и 50 этилового спирта тщательно перемешивают в фарфоровой ступке. В полученном растворе смачивают полоски фильтровальной бумаги, высушивают и нарезают узкими полосками шириной около 1 см. Цвет полученных бумажек - желтый. Индикаторные бумажки хранят не более 1 мес в темном месте. 6.1.5 Раствор гидроокиси калия массовой концентрации 400 
: 40 г гидроокиси калия переносят в мерную колбу вместимостью 100 
и растворяют в дистиллированной воде. Раствор доводят до метки.
: 40 г гидроокиси калия переносят в мерную колбу вместимостью 100 и растворяют в дистиллированной воде. Раствор доводят до метки. 6.1.6 Реактивы и растворы для окраски по Граму готовят по ГОСТ 10444.1.
6.2 Приготовление питательных сред