6.2.1 Бульон лактозный с бриллиантовым зеленым и желчью готовят по ГОСТ 30518.
6.2.2 Бульон Мак-Конки готовят по ГОСТ 30518.
6.2.3 Бульон глюкозо-фосфатный, сухой промышленного производства.
6.2.4 Бульон мясо-пептонный с триптофаном: 0,05 г L-триптофана растворяют в 100 
мясо-пептонного бульона, приготовленного по ГОСТ 10444.1, разливают в пробирки по 6-7 
и стерилизуют при температуре (
)°С в течение 20 мин.
мясо-пептонного бульона, приготовленного по ГОСТ 10444.1, разливают в пробирки по 6-7 и стерилизуют при температуре ( )°С в течение 20 мин. 6.2.5 Бульон Хоттингера готовят по ГОСТ 10444.1.
6.2.6 Среду Кесслер готовят по ГОСТ 30518.
6.2.7 Среда Кларка: в 1 
дистиллированной воды при нагревании растворяют 5,0 г пептона, 5,0 г глюкозы, 5,0 г фосфорнокислого двузамещенного калия, охлаждают до 45-55°С и устанавливают рН таким образом, чтобы после стерилизации он составлял при 25°С (
). Среду разливают по 5-6 
в пробирки и стерилизуют при температуре (
)°С в течение 15 мин или дробным методом - текучим паром по 30 мин три дня подряд.
дистиллированной воды при нагревании растворяют 5,0 г пептона, 5,0 г глюкозы, 5,0 г фосфорнокислого двузамещенного калия, охлаждают до 45-55°С и устанавливают рН таким образом, чтобы после стерилизации он составлял при 25°С ( ). Среду разливают по 5-6 в пробирки и стерилизуют при температуре ( )°С в течение 15 мин или дробным методом - текучим паром по 30 мин три дня подряд. 6.2.8 Среда (типа Клиглера) для первичной дифференциации энтеробактерий, сухая промышленного производства.
6.2.9 Среда Козера: в 1 
дистиллированной воды при нагревании растворяют 1,5 г фосфорнокислого двузамещенного натрия-аммония, 1,0 г фосфорнокислого однозамещенного калия, 0,2 г сернокислого магния и 2,5 г лимоннокислого натрия, охлаждают до 45-55°С и устанавливают рН таким образом, чтобы после стерилизации он составлял (
) при 25°С. Среду стерилизуют при температуре (
)°С в течение 15 мин.
дистиллированной воды при нагревании растворяют 1,5 г фосфорнокислого двузамещенного натрия-аммония, 1,0 г фосфорнокислого однозамещенного калия, 0,2 г сернокислого магния и 2,5 г лимоннокислого натрия, охлаждают до 45-55°С и устанавливают рН таким образом, чтобы после стерилизации он составлял ( ) при 25°С. Среду стерилизуют при температуре ( )°С в течение 15 мин. После стерилизации к 1 
среды добавляют 10 
спиртового раствора бромтимолового синего массовой концентрации 5 
, затем среду разливают по 6-7 
в стерильные пробирки. Приготовленная среда имеет оливково-зеленый цвет.
среды добавляют 10 спиртового раствора бромтимолового синего массовой концентрации 5 , затем среду разливают по 6-7 в стерильные пробирки. Приготовленная среда имеет оливково-зеленый цвет. 6.2.10 Среда Симмонса: к среде Козера перед стерилизацией добавляют 18-20 г агара. Среду после стерилизации и добавления раствора бромтимолового синего разливают по 6-7 
в стерильные пробирки или в чашки Петри. Среду в пробирках скашивают.
в стерильные пробирки или в чашки Петри. Среду в пробирках скашивают. Цитратный агар Симмонса выпускается промышленностью в сухом виде.
6.2.11 Среды с углеводами (среды Гисса) готовят по ГОСТ 10444.1 или используют для приготовления сухие среды промышленного производства.
Допускается сухую среду Гисса с углеводами готовить на основе сухого питательного агара: к 7,3 г сухого питательного агара прибавляют 3,65 г соответствующего углевода (глюкозы, лактозы, целлобиозы или сорбита), 0,38 г натрия фосфорнокислого двузамещенного, 3,65 г натрия хлористого, 0,02 г бромкрезолового пурпурового. Смесь тщательно перемешивают в фарфоровой ступке и хранят герметично закрытой в темном месте. Полученные 15 г порошка рассчитаны на приготовление 1 
среды. При приготовлении среды порошок тщательно размешивают в дистиллированной воде, кипятят 1-2 мин, не допуская пригорания, фильтруют, разливают по 5-6 
в пробирки и стерилизуют при температуре (
)°С в течение 20 мин или дробным методом - текучим паром по 30 мин три дня подряд. Приготовленная среда имеет фиолетовый цвет.
среды. При приготовлении среды порошок тщательно размешивают в дистиллированной воде, кипятят 1-2 мин, не допуская пригорания, фильтруют, разливают по 5-6 в пробирки и стерилизуют при температуре ( )°С в течение 20 мин или дробным методом - текучим паром по 30 мин три дня подряд. Приготовленная среда имеет фиолетовый цвет. 6.2.12 Среда Эндо, сухая промышленного производства.
6.2.13 Трехсахарный агар готовят по ГОСТ 30519.
6.2.14 Среды из сухих препаратов промышленного производства готовят по прописям, указанным на этикетках.
6.2.15 Тест-системы для биохимической идентификации промышленного производства.
7 Проведение анализа
7.1 Посевы для определения количества E.coli в 1 г (
) продукта и выявления E.coli в определенной навеске продукта проводят по ГОСТ 30518.
) продукта и выявления E.coli в определенной навеске продукта проводят по ГОСТ 30518. Посевы на агаризованной и жидких средах инкубируют при температуре (
)°С в течение 24-48 ч. Чашки Петри инкубируют дном вверх. Посевы просматривают через (
) ч, отмечают положительные посевы в жидких средах, а окончательный учет проводят через (
) ч.
)°С в течение 24-48 ч. Чашки Петри инкубируют дном вверх. Посевы просматривают через ( ) ч, отмечают положительные посевы в жидких средах, а окончательный учет проводят через ( ) ч. Положительными считают посевы в жидкие среды, в которых имеет место рост микроорганизмов, проявляющийся в помутнении среды, образовании газа, подкислении среды (то есть изменении цвета среды).
7.2 Для подтверждения принадлежности микроорганизмов, выросших в жидких средах, к E.coli делают пересевы по ГОСТ 26670 на поверхность среды Эндо, приготовленной по 6.2.12.
Посевы инкубируют при температуре (
)°С в течение (
) ч.
)°С в течение ( ) ч. 7.3 Посевы на агаризованной среде по 7.1 и 7.2 просматривают после инкубирования и отмечают рост характерных для E.coli колоний.
На среде Эндо E.coli образует колонии от бледно-розового до темно-красного цвета часто с металлическим блеском.
Для дальнейшего подтверждения принадлежности выросших колоний к E.coli отбирают по три колонии каждого типа.
Из отобранных колоний приготавливают мазки, окрашивают их по Граму по ГОСТ 30425. Параллельно в каждой отобранной колонии у бактерий по ГОСТ 29184 определяют отсутствие оксидазы.
Оксидазоотрицательные бактерии пересевают на поверхность мясо-пептонного агара или среды, приготовленной из сухого питательного агара. Посевы инкубируют до появления видимого роста при температуре (
)°С.
)°С. 7.4 У оксидазоотрицательных грамотрицательных культур (палочки размером 
мкм), выросших в пересевах по 7.3, определяют возможность образования индола, ацетоина, сероводорода, утилизации цитрата, интенсивность ферментации углеводов с образованием кислоты, ферментацию сорбита, глюкозы и лактозы.
мкм), выросших в пересевах по 7.3, определяют возможность образования индола, ацетоина, сероводорода, утилизации цитрата, интенсивность ферментации углеводов с образованием кислоты, ферментацию сорбита, глюкозы и лактозы. 7.4.1 Определение образования индола
Культуру высевают в пробирку с бульоном Хотшнгера, приготовленным по 6.2.5, или мясо-пептонным бульоном с триптофаном, приготовленным по 6.2.4. Под пробку в пробирку помещают полоску индикаторной бумажки, приготовленной по 6.1.4. Посевы инкубируют при температуре (
)°С в течение 24 ч. Если за время инкубирования посевов в среде накапливается индол, то желтый цвет индикаторной бумажки меняется на цвет от сиренево-розового до интенсивного малинового.
)°С в течение 24 ч. Если за время инкубирования посевов в среде накапливается индол, то желтый цвет индикаторной бумажки меняется на цвет от сиренево-розового до интенсивного малинового. Образование индола можно определить с помощью реактивов Эрлиха и Ковача, приготовленных по 6.1.2. Для этого к 5 
24-часовой культуры добавляют 1 
одного из реактивов. Образование красного слоя на поверхности культуральной жидкости указывает на положительную реакцию.
24-часовой культуры добавляют 1 одного из реактивов. Образование красного слоя на поверхности культуральной жидкости указывает на положительную реакцию. E.coli образует индол.
7.4.2 Определение образования ацетоина (реакция Фогес-Проскауэра)
Культуру высевают в пробирки со средой Кларка, приготовленной по 6.2.7. Посевы инкубируют при температуре (36_1) °С в течение 48 ч.
После инкубирования посевов к 1 
отобранной культуральной жидкости прибавляют 0,6 
раствора 
, приготовленного по 6.1.3, и 0,2 
раствора гидроокиси калия, приготовленного по 6.1.5. После прибавления каждого реактива пробирку встряхивают. Появление розового окрашивания через 15 - 60 мин указывает на положительную реакцию.
отобранной культуральной жидкости прибавляют 0,6 раствора , приготовленного по 6.1.3, и 0,2 раствора гидроокиси калия, приготовленного по 6.1.5. После прибавления каждого реактива пробирку встряхивают. Появление розового окрашивания через 15 - 60 мин указывает на положительную реакцию. E.coli не образует ацетоин.
7.4.3 Определение утилизации цитрата
Культуру высевают в пробирки со средой Козера, приготовленной по 6.2.9, или на поверхность среды Симмонса, приготовленной по 6.2.10. Посевы инкубируют при температуре (
)°С в течение 24 - 48 ч. Изменение оливково-зеленого цвета сред на васильковый, синий указывает на положительную реакцию.
)°С в течение 24 - 48 ч. Изменение оливково-зеленого цвета сред на васильковый, синий указывает на положительную реакцию. E.coli не утилизирует цитрат.
7.4.4 Определение интенсивности ферментации углеводов с образованием кислоты (реакция с метил-рот)
Культуру высевают в пробирки с глюкозо-фосфатным бульоном или средой Кларка или используют посевы после отбора 1 
культуральной жидкости по 7.4.2. Посевы инкубируют при температуре (
)°С в течение 48 ч. К 5 
культуральной жидкости прибавляют 5-10 капель реактива Кларка, приготовленного по 6.1.1. Появление через 1 мин красного цвета культуральной жидкости указывает на ферментацию углеводов до рН ниже 5,0.
культуральной жидкости по 7.4.2. Посевы инкубируют при температуре ( )°С в течение 48 ч. К 5 культуральной жидкости прибавляют 5-10 капель реактива Кларка, приготовленного по 6.1.1. Появление через 1 мин красного цвета культуральной жидкости указывает на ферментацию углеводов до рН ниже 5,0. E.coli интенсивно ферментирует углеводы (реакция с метил-рот положительная).
7.4.5 Определение ферментации сорбита, глюкозы и лактозы
Культуру высевают в среды Гисса с сорбитом или глюкозой, или лактозой приготовленные по 6.2.11. Посевы инкубируют при температуре (
)°С в течение 24 ч, а на среде Гисса с лактозой при температуре (
)°С в течение 24 ч.
)°С в течение 24 ч, а на среде Гисса с лактозой при температуре ( )°С в течение 24 ч. E.coli ферментирует глюкозу, лактозу и сорбит.
При ферментации глюкозы образуется газ. Ферментацию глюкозы можно учитывать в засеянных косяках трехсахарного агара или среды Клиглера по изменению цвета столбика среды и образованию в нем газа.
Ферментацию лактозы учитывают по изменению цвета скошенной поверхности среды Клиглера.
Ферментацию сорбита учитывают по изменению цвета среды.