ПРИЛОЖЕНИЕ В Обязательное. СПОСОБЫ ЗАРАЖЕНИЯ СПОРАМИ ПЛЕСНЕВЫХ ГРИБОВ
(См., кроме того, разд.9 настоящего стандарта)
В1. Прежде чем приступить к заражению изделий спорами плесневых грибов, следует изучить приложение С настоящего стандарта.
В1.1. Нанесение суспензии спор плесневых грибов на испытуемые образцы и контрольные полоски распылением из пульверизатора является широко применяемым способом заражения. Выходное отверстие пульверизатора должно быть достаточно большим, чтобы не засоряться кусочками мицелия. Широко применяется в качестве пульверизатора аэрограф. Непосредственно перед использованием контейнер и пульверизатор всегда стерилизуются.
В1.2. Если поверхность образца твердая, отшлифованная, то споры, наносимые при распылении, могут не налипнуть на эту поверхность. В таких случаях большой эффект может иметь осторожное нанесение споровой суспензии на поверхность изделия мягкой стерилизованной кисточкой.
В1.3. На небольшие образцы споровую суспензию быстро и эффективно можно наносить способом погружения.
В2. Рекомендуется осуществлять все способы нанесения спор плесневых грибов в микробиологическом вытяжном шкафу (МВШ) из-за вероятности образования аэрозоли.
В3. Образцы больших размеров должны, если возможно, подвергаться заражению поблочно в соответствии с п.1.7, но, если они слишком велики, чтобы быть размещенными в МВШ, следует предусмотреть необходимость создания над ними временной вытяжки. Такая вытяжная труба должна быть оснащена той же микробиологической системой вытяжки, какая установлена в МВШ.
Альтернативно можно разместить образец больших размеров в камере влажности, нанести на него кисточкой суспензию, а затем проводить выдержку. Капли суспензии с поверхности камеры должны быть удалены этанолом, как указано в приложении D настоящего стандарта. Несмотря на то, что при этом методе не предусматривается образование аэрозоли, а камера оснащена рекомендуемой системой вытяжки, эта система должна работать во время заражения образца суспензией спор грибов.
ПРИЛОЖЕНИЕ С Обязательное. РЕКОМЕНДУЕМЫЕ МЕРЫ БЕЗОПАСНОСТИ
С1. Необходимо принять все меры, чтобы свести к минимуму попадание спор плесневых грибов в дыхательные пути, а также на кожу, особенно около ногтей.
С2. Споры плесневых грибов могут попасть в дыхательные пути человека во время переноса или осмотра испытательных или контрольных образцов, а также движения потоков воздуха, например при открывании и закрывании дверцы камеры и крышек контейнеров. Опасность попадания спор в дыхательные пути увеличивается, когда споры высыхают и легко разносятся воздухом. Еще больший риск вдыхания спор существует при нанесении на изделия споровой суспензии способом распыления из пульверизатора.
С3. Непосредственной защитой от попадания в дыхательные пути спор (диаметром от 1 до 10 мкм), разносимых воздухом, может служить стандартный респиратор, снабженный противопылевым фильтром. Марля или неплотная маска не обеспечивает достаточной защиты. Предпочтительным способом защиты является использование МВШ.
С4. Для того чтобы свести к минимуму опасность попадания спор плесени на кожу при работах с культурами грибов, суспензией и испытательными образцами, используют защитные перчатки. Перчатки могут быть изготовлены из имеющейся разновидности пластика или стерилизованной резины. После применения перчатки должны быть продезинфицированы этанолом и промыты.
С5. Все операции, связанные с открыванием контейнеров с плесневыми культурами, подготовкой споровой суспензии, нанесением суспензии на испытуемые образцы и контрольные полоски, осмотром и измерением прошедших выдержку образцов должны проводиться в МВШ, обеспечивающем микробиологическую безопасность, с соблюдением следующих мер предосторожности по предотвращению образования аэрозолей:
а)использовать соответствующий смачивающий агент (см. п.4.2.1) при подготовке споровой суспензии;
б)протирать внешние поверхности контейнеров 70%-ным этанолом перед извлечением их из МВШ и помещением в камеру для выдержки в условиях сухого тепла;
в)протирать или мыть изделия 70%-ным этанолом после окончания испытания и когда изделия находятся в МВШ. Это делается для предотвращения поверхностного роста плесневых грибов перед окончательным обеззараживанием и уничтожением изделий.
С6. Если образец слишком велик, не помещается в контейнер и испытывается в камере влажности, споры могут распространяться по воздуху из-за перемещения потоков воздуха при открывании и закрывании дверей. Система вытяжки, оборудованная в камере, предотвращает движение спор плесневых грибов наружу при открывании двери, например, для осмотра изделия или других целей.
Система вытяжки должна выводиться в атмосферный воздух через микробиологические фильтры. Эти фильтры должны быть проверены перед началом испытания на чистоту и отсутствие роста плесневых грибов.
С7. Если для испытания используют большие передвижные термостаты, они должны быть закрыты защитной обшивкой и снабжены совершенным вытяжным шкафом с респиратором в соответствии с п.С3 или должна обеспечиваться соответствующая подача воздуха в вытяжной шкаф. Следует подчеркнуть, что фильтры, предназначенные для задержки спор, не служат защитой ни от газов, используемых для окуривания, ни от дыма или копоти.
С8. Если необходимо перенести образец из одного МВШ в другой, следует принять соответствующие меры предосторожности для охраны здоровья персонала.
С9. Все камеры и аппаратура, используемые для испытаний на грибостойкость, должны быть обеззаражены сразу после завершения испытания в соответствии с приложением D.
С10. Испытуемые и контрольные образцы к концу испытания могут быть сильно поражены плесенью, поэтому следует соблюдать осторожность при их уничтожении.
Уничтожение сжиганием не рекомендуется, так как в большинстве печей для сжигания не достигается полное сгорание и образующийся в процессе горения дым может разносить споры на большую площадь. Контрольные полоски перед окончательным уничтожением следует погрузить в емкость, содержащую раствор гипохлорита натрия (см. приложение D). Образцы и перчатки, которые можно сохранить, использовать или списать, первоначально должны быть обработаны, как указано в п.С5, подпункт в, перед окончательным обеззараживанием с помощью одного из способов, приведенных в приложении D.
С11. Перед началом испытания рекомендуется проводить обеззараживание камер и аппаратуры, если имеются сомнения относительно их частоты или, если обеззараживание проводилось более чем 28 дней назад.
С12. Запрещается курение и прием пищи в месте для проведения испытания.
ПРИЛОЖЕНИЕ D Обязательное. МЕТОДИКА ОБЕЗЗАРАЖИВАНИЯ
D1. Вполне возможно, что контейнеры и камеры влажности, используемые в качестве термостатов для прорастания спор и развития грибов, загрязняются грибами как испытуемых, так и случайных видов. Поэтому необходима методика обеззараживания испытательного оборудования. Эта методика должна быть эффективна против всех видов микроорганизмов, загрязняющих испытательное оборудование. Дезинфицирующие средства не должны оставаться на оборудовании, так как они могут повлиять на развитие грибов в процессе испытания. Кроме того, эти средства должны представлять минимальный риск для персонала.
D2. Рекомендуются следующие способы обеззараживания:
а)Промывание или погружение в раствор гипохлорита натрия.
Раствор должен готовиться из гипохлорита (содержащего хлора от 500 до 100 частей на миллион), растворенного в воде.
Зараженная грибами камера, контейнер или аппаратура должны покрываться этим раствором или погружаться в него, при этом должно гарантироваться его проникание во все щели. Не ранее чем через 30 мин после обеззараживания камеру, контейнер или аппаратуру тщательно промывают чистой проточной водой.
Гипохлорит натрия обладает сильным отбеливающим действием и поэтому может оказаться непригодным для обеззараживания некоторых материалов.
б)Обработка в автоклаве.
Этот метод подходит для контейнеров и образцов небольших размеров, которые выдерживают воздействие высокой температуры. Обработку проводят при давлении 10 кПа/1 бар и температуре 121 °С в течение 20 мин.
в)Протирание этанолом.
Этанол, разбавленный водой в соотношении 70% этанола, 30% воды, должен обильно наноситься чистой салфеткой на поверхности, куда могли попасть капли, струи или брызги споровой суспензии.
D3. Перед уничтожением зараженных материалов, культур грибов, споровых суспензий и т.п. они должны быть обеззаражены, как указано в подпункте а или в п.D2.
D4. Пары формальдегида являются эффективным дезинфицирующим средством, но их невозможно затем полностью удалить, оставшийся осадок снова дает пары формальдегида в теплых замкнутых пространствах и тем самым подавляет развитие грибов при испытаниях.
Имеются и другие летучие дезинфицирующие вещества, но они представляют опасность в силу своих взрывоопасных и (или) токсичных свойств, особенно в случае применения больших камер.
Поэтому следует избегать применения формальдегида и других летучих дезинфицирующих веществ.
ПРИЛОЖЕНИЕ Е Справочное. Технологическая схема методики испытания
 | |
| 750 × 788 пикс. Открыть в новом окне | |
Рис.1
ПРИЛОЖЕНИЕ F Обязательное. РУКОВОДСТВО
F.1.Механизм заражения
Грибы развиваются в почве и на многих типах общеизвестных материалов. Они размножаются спорами, которые отделяются от основной культуры и затем прорастают и образуют новую культуру.
Эти споры малы и легко переносятся потоком воздуха. Они также прилипают к частицам пыли и попадают вместе с ними в оборудование.
Таким образом, все части оборудования, в которые проникает воздух, могут быть заражены спорами плесневых грибов, находящихся в воздухе.