Данные параметры хроматографического анализа позволяют также идентифицировать пик изоаскорбиновой кислоты, не являющейся витамином С.
Примечание - В качестве других приемлемых параметров хроматографического анализа можно использовать подвижную фазу, состоящую из 10% ацетонитрила и 90% смешанного водного раствора однозамещенного фосфата калия массовой концентрацией 13,6 г/дм
и цетримида концентрацией 2 г/дм в сочетании с колонкой, заполненной обращенно-фазовым сорбентом с привитыми октильными группами (С
) размером частиц 10 мкм, длиной 250 мм, внутренним диаметром 4,6 мм, при скорости потока (1,0±0,1) см /мин.
Примечание - В качестве других приемлемых параметров хроматографического анализа можно использовать подвижную фазу, состоящую из 10% ацетонитрила и 90% смешанного водного раствора однозамещенного фосфата калия массовой концентрацией 13,6 г/дм
и цетримида концентрацией 2 г/дм в сочетании с колонкой, заполненной обращенно-фазовым сорбентом с привитыми октильными группами (С ) размером частиц 10 мкм, длиной 250 мм, внутренним диаметром 4,6 мм, при скорости потока (1,0±0,1) см /мин.6.5 Количественное определение
Проводят хроматографический анализ раствора пробы и градуировочного раствора при одинаковых объемах инжекции (до 50 мм ). Обработку результатов проводят по методу внешнего стандарта либо с использованием градуировочной характеристики.
При использовании метода внешнего стандарта массовую концентрацию анализируемого вещества в растворе пробы рассчитывают, исходя из площади или высоты пика аналита на хроматограмме раствора пробы и соотношения между массовой концентрацией аналита в градуировочном растворе и площадью или высотой пика на хроматограмме этого раствора.
При использовании градуировочной характеристики контролируют соблюдение условия нахождения ее области определения в границах линейной зависимости аналитического сигнала от массовой концентрации аналита.
). Обработку результатов проводят по методу внешнего стандарта либо с использованием градуировочной характеристики.При использовании метода внешнего стандарта массовую концентрацию анализируемого вещества в растворе пробы рассчитывают, исходя из площади или высоты пика аналита на хроматограмме раствора пробы и соотношения между массовой концентрацией аналита в градуировочном растворе и площадью или высотой пика на хроматограмме этого раствора.
При использовании градуировочной характеристики контролируют соблюдение условия нахождения ее области определения в границах линейной зависимости аналитического сигнала от массовой концентрации аналита.
7 Обработка результатов
Расчет результата анализа проводят с использованием градуировочной характеристики или с помощью соответствующей программы интегратора, либо применяют следующий упрощенный способ.
Массовую долю аскорбиновой кислоты
, мг/100 г, вычисляют по формуле
, (2)
Массовую долю аскорбиновой кислоты
, мг/100 г, вычисляют по формуле , (2) где 
- площадь или высота пика L-аскорбиновой кислоты на хроматограмме раствора пробы (см. 6.3.2), в единицах площади или высоты;
- массовая концентрация L-аскорбиновой кислоты в градуировочном растворе, мкг/см ;
- общий объем приготовленного по 6.3.1 раствора пробы перед проведением реакции восстановления, см ;
- коэффициент разбавления, применяемого при проведении реакции восстановления (в данном случае 
2,5);
100 - коэффициент пересчета результата в мг на 100 г;
- площадь или высота пика L-аскорбиновой кислоты на хроматограмме градуировочного раствора (см. 4.5.1), в единицах площади или высоты;
- масса навески пробы, г;
1000 - коэффициент пересчета из микрограммов в миллиграммы.
Результат выражают в мг/100 г.
В случае, если процедура анализа включала в себя операцию осаждения загустителей по 6.3.2, результат, полученный по формуле (2), умножают на 5/4.
- площадь или высота пика L-аскорбиновой кислоты на хроматограмме раствора пробы (см. 6.3.2), в единицах площади или высоты; - массовая концентрация L-аскорбиновой кислоты в градуировочном растворе, мкг/см ; - общий объем приготовленного по 6.3.1 раствора пробы перед проведением реакции восстановления, см ; - коэффициент разбавления, применяемого при проведении реакции восстановления (в данном случае 2,5);100 - коэффициент пересчета результата в мг на 100 г;
- площадь или высота пика L-аскорбиновой кислоты на хроматограмме градуировочного раствора (см. 4.5.1), в единицах площади или высоты; - масса навески пробы, г;1000 - коэффициент пересчета из микрограммов в миллиграммы.
Результат выражают в мг/100 г.
В случае, если процедура анализа включала в себя операцию осаждения загустителей по 6.3.2, результат, полученный по формуле (2), умножают на 5/4.
8 Прецизионность
8.1 Общие положения
Значения характеристик прецизионности при определении витамина С были получены в 1997 г. в результате межлабораторных испытаний, проведенных в соответствии с ИСО 5725 [2], [4]. Для других областей содержания аналита и типов матриц значения характеристик прецизионности методики могут отличаться от значений, приведенных в приложении В.
8.2 Повторяемость
Абсолютное расхождение между результатами двух независимых единичных испытаний, полученными одним методом на идентичном объекте испытаний в одной лаборатории одним оператором с использованием одного оборудования в течение короткого промежутка времени, должно превышать предел повторяемости
не более чем в 5% случаев.
Значения предела повторяемости равны:
апельсиновый сок:
54,6 мг/100 г, 
6,4 мг/100 г;
овощной консервированный суп: 35,6 мг/100 г, 3,7 мг/100 г;
сухое молоко (порошок): 100,3 мг/100 г, 17,9 мг/100 г;
суп-концентрат сублимационной сушки: 169,3 мг/100 г, 42,0 мг/100 г;
сухой завтрак (концентрат): 102,6 мг/100 г, 28,7 мг/100 г;
фруктовые консервы для детского питания: 47,1 мг/100 г, 7,1 мг/100 г.
Значения характеристик прецизионности при определении витамина С были получены в 1997 г. в результате межлабораторных испытаний, проведенных в соответствии с ИСО 5725 [2], [4]. Для других областей содержания аналита и типов матриц значения характеристик прецизионности методики могут отличаться от значений, приведенных в приложении В.
8.2 Повторяемость
Абсолютное расхождение между результатами двух независимых единичных испытаний, полученными одним методом на идентичном объекте испытаний в одной лаборатории одним оператором с использованием одного оборудования в течение короткого промежутка времени, должно превышать предел повторяемости
не более чем в 5% случаев.Значения предела повторяемости равны:
апельсиновый сок:
54,6 мг/100 г, 6,4 мг/100 г;овощной консервированный суп:
35,6 мг/100 г, 3,7 мг/100 г;сухое молоко (порошок):
100,3 мг/100 г, 17,9 мг/100 г;суп-концентрат сублимационной сушки:
169,3 мг/100 г, 42,0 мг/100 г;сухой завтрак (концентрат):
102,6 мг/100 г, 28,7 мг/100 г;фруктовые консервы для детского питания:
47,1 мг/100 г, 7,1 мг/100 г. 8.3 Воспроизводимость
Абсолютное расхождение между результатами двух единичных испытаний, полученными одним методом на идентичном объекте испытаний в разных лабораториях разными операторами с использованием разного оборудования, должно превышать предел воспроизводимости
не более чем в 5% случаев.
Значения предела воспроизводимости равны:
апельсиновый сок: 54,6 мг/100 г, 
30,3 мг/100 г;
овощной консервированный суп: 35,6 мг/100 г, 21,7 мг/100 г;
сухое молоко (порошок): 100,3 мг/100 г, 32,2 мг/100 г;
суп-концентрат сублимационной сушки: 169,3 мг/100 г, 74,3 мг/100 г;
сухой завтрак (концентрат): 102,6 мг/100 г, 56,2 мг/100 г;
фруктовые консервы для детского питания: 47,1 мг/100 г, 23,9 мг/100 г.
Абсолютное расхождение между результатами двух единичных испытаний, полученными одним методом на идентичном объекте испытаний в разных лабораториях разными операторами с использованием разного оборудования, должно превышать предел воспроизводимости
не более чем в 5% случаев.Значения предела воспроизводимости равны:
апельсиновый сок:
54,6 мг/100 г, 30,3 мг/100 г;овощной консервированный суп:
35,6 мг/100 г, 21,7 мг/100 г;сухое молоко (порошок):
100,3 мг/100 г, 32,2 мг/100 г;суп-концентрат сублимационной сушки:
169,3 мг/100 г, 74,3 мг/100 г;сухой завтрак (концентрат):
102,6 мг/100 г, 56,2 мг/100 г;фруктовые консервы для детского питания:
47,1 мг/100 г, 23,9 мг/100 г.9 Протокол результатов испытаний
Протокол результатов испытаний должен содержать, как минимум, следующие сведения:
- всю информацию, необходимую для идентификации пробы;
- ссылку на настоящий стандарт или использованный метод;
- дату и время отбора пробы (если известны);
- дату поступления пробы в лабораторию;
- дату проведения испытания;
- результаты испытания с указанием единиц измерения;
- все особенности, наблюдавшиеся при проведении испытания;
- все операции, не оговоренные в методике или считающиеся необязательными, которые могли повлиять на
- всю информацию, необходимую для идентификации пробы;
- ссылку на настоящий стандарт или использованный метод;
- дату и время отбора пробы (если известны);
- дату поступления пробы в лабораторию;
- дату проведения испытания;
- результаты испытания с указанием единиц измерения;
- все особенности, наблюдавшиеся при проведении испытания;
- все операции, не оговоренные в методике или считающиеся необязательными, которые могли повлиять на
результат испытания.
Приложение А
(справочное)
Пример хроматограммы
Рисунок А.1 - Пример хроматограммы при анализе аскорбиновой кислоты в апельсиновом соке с помощью ВЭЖХ
Рисунок А.1 - Пример хроматограммы при анализе аскорбиновой кислоты в апельсиновом соке с помощью ВЭЖХ
 | |
| 490 × 286 пикс. Открыть в новом окне | |
Рисунок А.1 - Пример хроматограммы при анализе аскорбиновой кислоты в апельсиновом соке с помощью ВЭЖХ
Условия хроматографического анализа:
колонка, заполненная сорбентом Lichrospher 100 RP 18 с блокированными остаточными силанольными группами размером частиц сорбента 5 мкм, внутренний диаметр колонки 4,0 мм, длина 250 мм;
подвижная фаза - смесь раствора А и раствора В (см.4.2.11);
скорость потока - 0,7 см /мин;
инжектируемый объем - 30 мм ;
длина волны детектирования - 265 нм;
Условия хроматографического анализа:
колонка, заполненная сорбентом Lichrospher 100 RP 18 с блокированными остаточными силанольными группами размером частиц сорбента 5 мкм, внутренний диаметр колонки 4,0 мм, длина 250 мм;
подвижная фаза - смесь раствора А и раствора В (см.4.2.11);
скорость потока - 0,7 см
/мин;инжектируемый объем - 30 мм
;длина волны детектирования - 265 нм;
время удерживания аскорбиновой кислоты - 
11,953 мин.ъ
11,953 мин.ъПриложение Въ
(справочное)
Данные по прецизионности методики
Приведенные ниже данные получены в результате межлабораторных испытаний [2], [4]. Процедура проведения испытания не включала в себя операцию восстановления L-дегидроаскорбиновой кислоты.
Примечание - После проведения данных межлабораторных испытаний ИСО 5725:1986 был заменен на ИСО 5725-1, ИСО 5725-2, ИСО 5725-3, ИСО 5725-4 и ИСО 5725-6 (все издания 1994 г.), а также ИСО 5725-5:1998.
Таблица В.1 - Данные по прецизионности определения общего содержания витамина С
Примечание - После проведения данных межлабораторных испытаний ИСО 5725:1986 был заменен на ИСО 5725-1, ИСО 5725-2, ИСО 5725-3, ИСО 5725-4 и ИСО 5725-6 (все издания 1994 г.), а также ИСО 5725-5:1998.
Таблица В.1 - Данные по прецизионности определения общего содержания витамина С
| Образец | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 |
| Год проведения испытаний | 1997 | 1997 | 1997 | 1997 | 1997 | 1997 |
| Число лабораторий-участников | 15 | 15 | 15 | 15 | 15 | 15 |
| Число лабораторий, за исключением выбросов | 14 | 15 | 14 | 14 | 14 | 14 |
| Число принятых результатов | 28 | 30 | 28 | 28 | 28 | 28 |
Среднее значение  , мг/100 г | 54,6 | 35,6 | 100,3 | 169,3 | 102,6 | 47,1 |
Стандартное отклонение повторяемости  , мг/100 г | 2,3 | 1,3 | 6,3 | 14,8 | 10,2 | 2,5 |
| Относительное стандартное отклонение повторяемости, % | 4,2 | 3,6 | 6,3 | 8,8 | 9,9 | 5,3 |
Предел повторяемости ( ), мг/100 г | 6,4 | 3,7 | 17,9 | 42,0 | 28,7 | 7,1 |
Стандартное отклонение воспроизводимости  , мг/100 г | 10,7 | 7,7 | 11,4 | 26,2 | 19,8 | 8,5 |
| Относительное стандартное отклонение воспроизводимости, % | 19,7 | 21,6 | 11,4 | 15,5 | 9,3 | 18,0 |
Предел воспроизводимости ( ), мг/100 г | 30,3 | 21,7 | 32,2 | 74,3 | 56,2 | 23,9 |
| 1 - апельсиновый сок; 2 - овощной консервированный суп; 3 - сухое молоко; 4 - суп-концентрат сублимационной сушки; 5 - сухой завтрак (концентрат); 6 - фруктовые консервы для детского питания. | ||||||
Приложение ДА
(справочное)
Сведения о соответствии ссылочных международных стандартов ссылочным национальным стандартам Российской Федерации
Таблица ДА.1
| Обозначение ссылочного международного стандарта | Степень соответствия | Обозначение и наименование соответствующего национального стандарта |
| ЕН ИСО 3696 | MOD | ГОСТ Р 52501-2005 (ИСО 3696:1987) "Вода для лабораторного анализа. Технические условия" |
| Примечание - В настоящей таблице использовано следующее условное обозначение степени соответствия стандартов: - MOD - модификационный стандарт | ||
Библиография
[1] Dennison D.B., Brawley T.G., Hunter G.L.K., (1981), J. Agric. Food Chem., 29, 925-927
[2] Arella F., Deborde J.L., Bourguignon J.B., Hasselmann C. (1997) Ann. Fals. Exp. Chim., 90, No 940, 217-233
[3] Coustard J.M., Sudraud G., (1981), Journal of Chromatogtaphy, 219, 338-3-42
[4] ISO 5725:1986, Precision of test methods. Determination of repeatability and reproducibility for a standard test method by inter-laboratory tests
______________________________________________________________
[2] Arella F., Deborde J.L., Bourguignon J.B., Hasselmann C. (1997) Ann. Fals. Exp. Chim., 90, No 940, 217-233
[3] Coustard J.M., Sudraud G., (1981), Journal of Chromatogtaphy, 219, 338-3-42
[4] ISO 5725:1986, Precision of test methods. Determination of repeatability and reproducibility for a standard test method by inter-laboratory tests
______________________________________________________________