НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
Дата введения 01.01.2012
Предисловие
Цели и принципы стандартизации в Российской Федерации установлены Федеральным законом от 27 декабря 2002 г. N 184-ФЗ "О техническом регулировании", а правила применения национальных стандартов Российской Федерации - ГОСТ Р 1.0-2004 "Стандартизация в Российской Федерации. Основные положения"
Сведения о стандарте
1 РАЗРАБОТАН Государственным научным учреждением Всероссийским научно-исследовательским институтом птицеперерабатывающей промышленности Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ ВНИИПП Россельхозакадемии)
2 ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 116 "Продукты переработки птицы, яиц и сублимационной сушки"
3 УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 30 ноября 2010 г. N 673-ст
4 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ
Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодно издаваемом информационном указателе "Национальные стандарты", а текст изменений и поправок - в ежемесячно издаваемых информационных указателях "Национальные стандарты". В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячно издаваемом информационном указателе "Национальные стандарты". Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет
Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодно издаваемом информационном указателе "Национальные стандарты", а текст изменений и поправок - в ежемесячно издаваемых информационных указателях "Национальные стандарты". В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячно издаваемом информационном указателе "Национальные стандарты". Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет
1 Область применения
Настоящий стандарт распространяется на пищевые яйца и пищевые продукты переработки яиц сельскохозяйственной птицы (жидкие, концентрированные и сухие - яичная масса, яичный меланж, яичный желток) (далее - продукты) и устанавливает газохроматографический метод определения жирно-кислотного состава - массовой доли индивидуальных жирных кислот.
2 Нормативные ссылки
В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:
ГОСТ Р ИСО 5725-1-2002 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 1. Основные положения и определения
ГОСТ Р 51483-99 Масла растительные и жиры животные. Определение методом газовой хроматографии массовой доли метиловых эфиров индивидуальных жирных кислот к их сумме
ГОСТ Р 52121-2003 Яйца куриные пищевые. Технические условия
ГОСТ Р 52943-2008 Птицеперерабатывающая промышленность. Продукты переработки яиц сельскохозяйственной птицы пищевые. Термины и определения
ГОСТ Р 53228-2008 Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания
ГОСТ Р 53404-2009 Яйца пищевые (индюшиные, цесариные, перепелиные, страусиные). Технические условия
ГОСТ Р 53669-2009 Пищевые продукты переработки яиц сельскохозяйственной птицы. Методы отбора проб и органолептического анализа
ГОСТ Р 53746-2009 Пищевые продукты переработки яиц сельскохозяйственной птицы. Методы физико-химического анализа
ГОСТ 12.1.004-91 Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования
ГОСТ 12.1.007-76 Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности
ГОСТ 12.1.010-76 Система стандартов безопасности труда. Взрывобезопасность. Общие требования
ГОСТ 12.1.019-79* Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты
______________
* На территории Российской Федерации документ не действует. Действует ГОСТ Р 12.1.019-2009, здесь и далее по тексту.
ГОСТ 1770-74 (ИСО 1042-83, ИСО 4788-80) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия
ГОСТ 3022-80 Водород технический. Технические условия
ГОСТ 3118-77 Реактивы. Кислота соляная. Технические условия
ГОСТ 3956-76 Силикагель технический. Технические условия
ГОСТ 4166-76 Реактивы. Натрий сернокислый. Технические условия
ГОСТ 4233-77 Реактивы. Натрий хлористый. Технические условия
ГОСТ Р ИСО 5725-1-2002 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 1. Основные положения и определения
ГОСТ Р 51483-99 Масла растительные и жиры животные. Определение методом газовой хроматографии массовой доли метиловых эфиров индивидуальных жирных кислот к их сумме
ГОСТ Р 52121-2003 Яйца куриные пищевые. Технические условия
ГОСТ Р 52943-2008 Птицеперерабатывающая промышленность. Продукты переработки яиц сельскохозяйственной птицы пищевые. Термины и определения
ГОСТ Р 53228-2008 Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания
ГОСТ Р 53404-2009 Яйца пищевые (индюшиные, цесариные, перепелиные, страусиные). Технические условия
ГОСТ Р 53669-2009 Пищевые продукты переработки яиц сельскохозяйственной птицы. Методы отбора проб и органолептического анализа
ГОСТ Р 53746-2009 Пищевые продукты переработки яиц сельскохозяйственной птицы. Методы физико-химического анализа
ГОСТ 12.1.004-91 Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования
ГОСТ 12.1.007-76 Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности
ГОСТ 12.1.010-76 Система стандартов безопасности труда. Взрывобезопасность. Общие требования
ГОСТ 12.1.019-79* Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты
______________
* На территории Российской Федерации документ не действует. Действует ГОСТ Р 12.1.019-2009, здесь и далее по тексту.
ГОСТ 1770-74 (ИСО 1042-83, ИСО 4788-80) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия
ГОСТ 3022-80 Водород технический. Технические условия
ГОСТ 3118-77 Реактивы. Кислота соляная. Технические условия
ГОСТ 3956-76 Силикагель технический. Технические условия
ГОСТ 4166-76 Реактивы. Натрий сернокислый. Технические условия
ГОСТ 4233-77 Реактивы. Натрий хлористый. Технические условия
ГОСТ 5829-71 Реактивы. Ацетил хлористый. Технические условия
ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия
ГОСТ 6995-77 Реактивы. Метанол-яд. Технические условия
ГОСТ 9147-80 Посуда и оборудование лабораторные фарфоровые. Технические условия
ГОСТ 9293-74 Азот газообразный и жидкий. Технические условия
ГОСТ 11109-90 Марля бытовая хлопчатобумажная. Общие технические условия
ГОСТ 14919-83 Электроплиты, электроплитки и жарочные электрошкафы бытовые. Общие технические условия
ГОСТ 17433-80 Промышленная чистота. Сжатый воздух. Классы загрязненности
ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры
ГОСТ 26703-93 Хроматографы аналитические газовые. Общие технические условия и методы испытаний
ГОСТ 28498-90 Термометры жидкостные стеклянные. Общие технические требования. Методы испытаний
ГОСТ 29169-91 (ИСО 648-77) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки с одной отметкой
ГОСТ 29227-91 (ИСО 835-1-81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования
Примечание - При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодно издаваемому информационному указателю "Национальные стандарты", который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по соответствующим ежемесячно издаваемым информационным указателям, опубликованным в текущем году. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.
ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия
ГОСТ 6995-77 Реактивы. Метанол-яд. Технические условия
ГОСТ 9147-80 Посуда и оборудование лабораторные фарфоровые. Технические условия
ГОСТ 9293-74 Азот газообразный и жидкий. Технические условия
ГОСТ 11109-90 Марля бытовая хлопчатобумажная. Общие технические условия
ГОСТ 14919-83 Электроплиты, электроплитки и жарочные электрошкафы бытовые. Общие технические условия
ГОСТ 17433-80 Промышленная чистота. Сжатый воздух. Классы загрязненности
ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры
ГОСТ 26703-93 Хроматографы аналитические газовые. Общие технические условия и методы испытаний
ГОСТ 28498-90 Термометры жидкостные стеклянные. Общие технические требования. Методы испытаний
ГОСТ 29169-91 (ИСО 648-77) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки с одной отметкой
ГОСТ 29227-91 (ИСО 835-1-81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования
Примечание - При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодно издаваемому информационному указателю "Национальные стандарты", который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по соответствующим ежемесячно издаваемым информационным указателям, опубликованным в текущем году. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.
3 Термины и определения
В настоящем стандарте применены термины по ГОСТ Р 52943.
4 Метрологические характеристики метода
4.1 Измерение массовой доли индивидуальных жирных кислот по отношению к сумме всех жирных кислот (метод внутренней нормализации)
Метрологические характеристики метода при доверительной вероятности 0,95 приведены в таблице 1.
Таблица 1
Метрологические характеристики метода при доверительной вероятности 0,95 приведены в таблице 1.
Таблица 1
 | |
| 672 × 303 пикс. Открыть в новом окне | |
4.2 Измерение массовой доли индивидуальных жирных кислот в липидах из экстрагированных продуктов (метод внутреннего стандарта)
Метрологические характеристики метода при доверительной вероятности 0,95 приведены в таблице 2.
Таблица 2
Метрологические характеристики метода при доверительной вероятности 0,95 приведены в таблице 2.
Таблица 2
 | |
| 660 × 280 пикс. Открыть в новом окне | |
5 Сущность метода
Сущность метода состоит в экстракции липидов из продуктов, получении метиловых эфиров жирных кислот переэтерификацией экстрагированных липидов с помощью кислотного катализатора (хлористый водород) в присутствии избытка метилового спирта, разделении смеси полученных метиловых эфиров методом капиллярной газовой хроматографии и измерении площадей хроматографических пиков.
Массовую долю индивидуальной жирной кислоты относительно суммы масс всех жирных кислот определяют отношением площади пика метилового эфира кислоты к сумме площадей идентифицированных хроматографических пиков всех метиловых эфиров жирных кислот (метод внутренней нормализации), массовую долю содержания индивидуальной жирной кислоты в липидах яичных продуктов определяют отношением площади пика метилового эфира кислоты к площади пика внутреннего стандарта (метод внутреннего стандарта).
Массовую долю индивидуальной жирной кислоты относительно суммы масс всех жирных кислот определяют отношением площади пика метилового эфира кислоты к сумме площадей идентифицированных хроматографических пиков всех метиловых эфиров жирных кислот (метод внутренней нормализации), массовую долю содержания индивидуальной жирной кислоты в липидах яичных продуктов определяют отношением площади пика метилового эфира кислоты к площади пика внутреннего стандарта (метод внутреннего стандарта).
6 Средства измерений, оборудование, материалы и реактивы
Газовый хроматограф с пламенно-ионизационным детектором (ПИД), пределом детектирования не более 5·10-12 г/с по ГОСТ 26703, оснащенный инжектором для капиллярных колонок с делением потока и управляющим вычислительным комплексом с программным обеспечением, позволяющим проводить разметку и определение площадей хроматографических пиков.
Капиллярная хроматографическая колонка с неподвижной фазой из сшитого полиэтиленгликоля длиной 30 м, с внутренним диаметром 0,32 мм и толщиной фазы 0,25 мкм или аналогичная колонка, обеспечивающая разделение пиков и продолжительность хроматографирования в соответствии с рисунком 1. Условия хроматографирования - в соответствии с 7.4.
Капиллярная хроматографическая колонка с неподвижной фазой из сшитого полиэтиленгликоля длиной 30 м, с внутренним диаметром 0,32 мм и толщиной фазы 0,25 мкм или аналогичная колонка, обеспечивающая разделение пиков и продолжительность хроматографирования в соответствии с рисунком 1. Условия хроматографирования - в соответствии с 7.4.
 | |
| 653 × 387 пикс. Открыть в новом окне | |
1 - бутилокситолуол; 2 - С14:0; 3 - С14:1n5; 4 - С16:0; 5 - С16:1n7; 6 - С17:0; 7 - С17:1; 8 - С18:0; 9 - С18:1n9; 10 - С18:1n7; 11 - С18:2n6; 12 - С18:3n3; 13 - С20:0; 14 - С20:1n9; 15 - С20:3n6; 16 - С20:4n6; 17 - С20:5n3; 18 - С23:0 (внутренний стандарт); 19 - С22:5n3; 20 - С22:6n3
Рисунок 1 - Хроматограмма метиловых эфиров жирных кислот липидов куриного яйца (колонка Omegawax 320 (Supelco))
Рисунок 1 - Хроматограмма метиловых эфиров жирных кислот липидов куриного яйца (колонка Omegawax 320 (Supelco))
Микрошприцы MШ-1 вместимостью 1 мм3 или аналогичные.
Ротационный испаритель типа ИР-2.
Весы лабораторные по ГОСТ Р 53228 с пределом допускаемой погрешности взвешивания не более ±0,0002 г.
Плитка электрическая по ГОСТ 14919.
Баня водяная.
Термостат суховоздушный типа ТС-80М или жидкостный термостат, обеспечивающий поддержание заданной температуры при (60±1) °С.
Термометр ртутный с диапазоном измерения температуры 0 °С - 100 °С и ценой деления шкалы 1 °С по ГОСТ 28498.
Часы.
Сушильный шкаф.
Гомогенизатор или миксер.
Автоклав с фторопластовой реакционной камерой рабочим объемом 25-30 см3 (например, аналитический автоклав - модель Т11 НПО "Анкон-АТ") или стеклянная виала вместимостью 25-35 см3 с завинчивающейся крышкой и фторопластовой прокладкой.
Колбы конические Кн-1-150-29/32 ТХС по ГОСТ 25336.
Колбы грушевидные Гр-100-14/23 ТХС по ГОСТ 25336.
Колбы мерные 2-25-1 и 2-100-1 по ГОСТ 1770.
Воронки В-36-50 ХС и В-56-80 ХС по ГОСТ 25336.
Воронки делительные ВД-1-250 ХС или ВД-3-250 ХС по ГОСТ 25336.
Пипетки 2-2-5, 2-2-25 или 2-2-20 по ГОСТ 29169.
Пипетки 1-1-1(2)-1 по ГОСТ 29227.
Пробирки П-2-5-14/23ХС, П-2-25-14/23 ХС по ГОСТ 1770 или П4-5-14/23, П4-25-14/23 по ГОСТ 25336.
Стаканы В-1-50 ХС и В-1-100 ХС по ГОСТ 25336.
Холодильник XIII-1-300-29/32 по ГОСТ 25336.
Цилиндры мерные 1-10-2, 1-50-1 и 2-100-1 по ГОСТ 1770.
Ступка фарфоровая с пестиком по ГОСТ 9147.
Палочка стеклянная.
Стекловата.
Марля по ГОСТ 11109.
Воздух класса "0" по ГОСТ 17433. Допускается использовать компрессоры, обеспечивающие необходимые давление и чистоту воздуха согласно инструкции по эксплуатации хроматографа.
Азот газообразный по ГОСТ 9293, ос.ч.
Водород технический марки А по ГОСТ 3022 или электролизный водород от генератора водорода.
Гексан для хроматографии.
Ацетил хлористый (ацетилхлорид) по ГОСТ 5829, ч.д.а.
Метанол по ГОСТ 6995, х.ч.
Бутилокситолуол (2,6-ди-трет-бутил-4-метоксифенол), массовая доля основного вещества не менее 95%.
Метиловый эфир трикозановой кислоты С23:0, массовая доля основного вещества не менее 99,0%.
Раствор в гексане смеси метиловых эфиров жирных кислот (от С10 до С24) для идентификации хроматографических пиков [1], [2].
Толуол, ос.ч.
Натрий сернокислый безводный по ГОСТ 4166, х.ч.
Натрий хлористый по ГОСТ 4233, х.ч., водный раствор массовой долей 10%.
Силикагель марки АСКГ по ГОСТ 3956.
Кислота соляная массовой долей не менее 35% по ГОСТ 3118, ос.ч.
Эфир диэтиловый (эфир этиловый), ос.ч., безводный, содержащий менее 0,05% этилового спирта.
Эфир петролейный перегнанный с температурой кипения не более 60 °С .
Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.
Допускается применение других средств измерений с метрологическими характеристиками и оборудования с техническими характеристиками не хуже, а также материалов и реактивов, по качеству не ниже указанных.
Ротационный испаритель типа ИР-2.
Весы лабораторные по ГОСТ Р 53228 с пределом допускаемой погрешности взвешивания не более ±0,0002 г.
Плитка электрическая по ГОСТ 14919.
Баня водяная.
Термостат суховоздушный типа ТС-80М или жидкостный термостат, обеспечивающий поддержание заданной температуры при (60±1) °С.
Термометр ртутный с диапазоном измерения температуры 0 °С - 100 °С и ценой деления шкалы 1 °С по ГОСТ 28498.
Часы.
Сушильный шкаф.
Гомогенизатор или миксер.
Автоклав с фторопластовой реакционной камерой рабочим объемом 25-30 см3 (например, аналитический автоклав - модель Т11 НПО "Анкон-АТ") или стеклянная виала вместимостью 25-35 см3 с завинчивающейся крышкой и фторопластовой прокладкой.
Колбы конические Кн-1-150-29/32 ТХС по ГОСТ 25336.
Колбы грушевидные Гр-100-14/23 ТХС по ГОСТ 25336.
Колбы мерные 2-25-1 и 2-100-1 по ГОСТ 1770.
Воронки В-36-50 ХС и В-56-80 ХС по ГОСТ 25336.
Воронки делительные ВД-1-250 ХС или ВД-3-250 ХС по ГОСТ 25336.
Пипетки 2-2-5, 2-2-25 или 2-2-20 по ГОСТ 29169.
Пипетки 1-1-1(2)-1 по ГОСТ 29227.
Пробирки П-2-5-14/23ХС, П-2-25-14/23 ХС по ГОСТ 1770 или П4-5-14/23, П4-25-14/23 по ГОСТ 25336.
Стаканы В-1-50 ХС и В-1-100 ХС по ГОСТ 25336.
Холодильник XIII-1-300-29/32 по ГОСТ 25336.
Цилиндры мерные 1-10-2, 1-50-1 и 2-100-1 по ГОСТ 1770.
Ступка фарфоровая с пестиком по ГОСТ 9147.
Палочка стеклянная.
Стекловата.
Марля по ГОСТ 11109.
Воздух класса "0" по ГОСТ 17433. Допускается использовать компрессоры, обеспечивающие необходимые давление и чистоту воздуха согласно инструкции по эксплуатации хроматографа.
Азот газообразный по ГОСТ 9293, ос.ч.
Водород технический марки А по ГОСТ 3022 или электролизный водород от генератора водорода.
Гексан для хроматографии.
Ацетил хлористый (ацетилхлорид) по ГОСТ 5829, ч.д.а.
Метанол по ГОСТ 6995, х.ч.
Бутилокситолуол (2,6-ди-трет-бутил-4-метоксифенол), массовая доля основного вещества не менее 95%.
Метиловый эфир трикозановой кислоты С23:0, массовая доля основного вещества не менее 99,0%.
Раствор в гексане смеси метиловых эфиров жирных кислот (от С10 до С24) для идентификации хроматографических пиков [1], [2].
Толуол, ос.ч.
Натрий сернокислый безводный по ГОСТ 4166, х.ч.
Натрий хлористый по ГОСТ 4233, х.ч., водный раствор массовой долей 10%.
Силикагель марки АСКГ по ГОСТ 3956.
Кислота соляная массовой долей не менее 35% по ГОСТ 3118, ос.ч.
Эфир диэтиловый (эфир этиловый), ос.ч., безводный, содержащий менее 0,05% этилового спирта.
Эфир петролейный перегнанный с температурой кипения не более 60 °С .
Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.
Допускается применение других средств измерений с метрологическими характеристиками и оборудования с техническими характеристиками не хуже, а также материалов и реактивов, по качеству не ниже указанных.
7 Подготовка к проведению испытаний
7.1 Приготовление смеси для получения метиловых эфиров [раствор хлористого водорода (HCI) в метаноле массовой долей 5,6%]
В высокую пробирку с пришлифованной пробкой вместимостью 25 см3 вносят с помощью пипетки 5 см3 метанола. Осторожно по каплям добавляют с помощью пипетки 0,5 см3 ацетилхлорида с соблюдением мер предосторожности по 13.3 (при добавлении ацетилхлорида происходит бурная реакция с образованием брызг, поэтому необходимо использовать высокую пробирку). Перемешивают, закрывают пробкой и выдерживают перед использованием в течение 10 мин.
Смесь готовят непосредственно перед каждым испытанием.
В высокую пробирку с пришлифованной пробкой вместимостью 25 см3 вносят с помощью пипетки 5 см3 метанола. Осторожно по каплям добавляют с помощью пипетки 0,5 см3 ацетилхлорида с соблюдением мер предосторожности по 13.3 (при добавлении ацетилхлорида происходит бурная реакция с образованием брызг, поэтому необходимо использовать высокую пробирку). Перемешивают, закрывают пробкой и выдерживают перед использованием в течение 10 мин.
Смесь готовят непосредственно перед каждым испытанием.
7.2 Приготовление стандартного раствора метилового эфира трикозановой кислоты С23:0 массовой концентрацией 5 мг/см3 (метод внутреннего стандарта)
В стакане вместимостью 50 см3 взвешивают 250 мг метилового эфира трикозановой кислоты с записью результата взвешивания в миллиграммах до одного десятичного знака, добавляют 25-30 мг бутилокситолуола (антиокислитель) и растворяют метиловый эфир трикозановой кислоты и бутилокситолуол в 30 см3 толуола (кристаллы метилового эфира трикозановой кислоты должны полностью раствориться, при необходимости стаканчик с содержимым можно подогреть до температуры 30 °С - 40 °С). Содержимое стакана количественно переносят в мерную колбу вместимостью 50 см3. Стакан три раза ополаскивают толуолом порциями по 3 см , которые добавляют в мерную колбу. Колбу выдерживают до достижения температуры раствора (20±1) °С, доводят объем толуолом до метки, закрывают пробкой и перемешивают.
Срок хранения стандартного раствора - 1 мес в холодильнике при температуре (6±2) °С.
Перед использованием колбу выдерживают до достижения температуры раствора (20±1) °С.
В стакане вместимостью 50 см3 взвешивают 250 мг метилового эфира трикозановой кислоты с записью результата взвешивания в миллиграммах до одного десятичного знака, добавляют 25-30 мг бутилокситолуола (антиокислитель) и растворяют метиловый эфир трикозановой кислоты и бутилокситолуол в 30 см3 толуола (кристаллы метилового эфира трикозановой кислоты должны полностью раствориться, при необходимости стаканчик с содержимым можно подогреть до температуры 30 °С - 40 °С). Содержимое стакана количественно переносят в мерную колбу вместимостью 50 см3. Стакан три раза ополаскивают толуолом порциями по 3 см , которые добавляют в мерную колбу. Колбу выдерживают до достижения температуры раствора (20±1) °С, доводят объем толуолом до метки, закрывают пробкой и перемешивают.
Срок хранения стандартного раствора - 1 мес в холодильнике при температуре (6±2) °С.
Перед использованием колбу выдерживают до достижения температуры раствора (20±1) °С.
7.3 Приготовление раствора бутилокситолуола в толуоле (метод внутренней нормализации)
В стакан вместимостью 100 см3 помещают 25-35 мг бутилокситолуола, добавляют с помощью мерного цилиндра 50 см3 толуола и перемешивают до полного растворения бутилокситолуола. Раствор хранят при комнатной температуре в плотно закрытой стеклянной емкости не более 5 мес.
В стакан вместимостью 100 см3 помещают 25-35 мг бутилокситолуола, добавляют с помощью мерного цилиндра 50 см3 толуола и перемешивают до полного растворения бутилокситолуола. Раствор хранят при комнатной температуре в плотно закрытой стеклянной емкости не более 5 мес.
7.4 Приготовление воронки для фильтрования раствора метиловых эфиров жирных кислот
В нижнюю часть носика воронки диаметром 36 мм и высотой 50 мм по ГОСТ Р 25336* вставляют тампон из кусочка обезжиренной стекловаты, насыпают силикагель АСКГ до образования слоя высотой примерно 15-20 мм, сверху насыпают слой безводного сернокислого натрия так, чтобы он полностью заполнил носик воронки и нижнюю часть сужения воронки слоем высотой примерно 5 мм.
______________
* Вероятно ошибка оригинала. Следует читать: ГОСТ 25336.
В нижнюю часть носика воронки диаметром 36 мм и высотой 50 мм по ГОСТ Р 25336* вставляют тампон из кусочка обезжиренной стекловаты, насыпают силикагель АСКГ до образования слоя высотой примерно 15-20 мм, сверху насыпают слой безводного сернокислого натрия так, чтобы он полностью заполнил носик воронки и нижнюю часть сужения воронки слоем высотой примерно 5 мм.
______________
* Вероятно ошибка оригинала. Следует читать: ГОСТ 25336.
7.5 Подготовка газового хроматографа и капиллярной колонки
Подготовку хроматографа и капиллярной колонки (кондиционирование колонки) проводят в соответствии с инструкциями по эксплуатации. При работе с капиллярной колонкой Omegawax 320 устанавливают следующий режим работы хроматографа:
- температура детектора 260 °С;
- температура инжектора 250 °С;
- температура термостата колонки 200 °С;
- давление газа-носителя (азота) в испарителе 85 кПа;
- деление потока газа-носителя в испарителе 1:30;
- расходы водорода, воздуха и азота (поддув в детектор) устанавливают в соответствии с инструкцией к эксплуатации хроматографа или подбирают путем хроматографирования тестовых смесей метиловых эфиров для обеспечения максимальной чувствительности пламенно-ионизационного детектора.
Режимы хроматографа при работе с другими типами капиллярных колонок подбирают так, чтобы качество разделения и время регистрации хроматограмм было не хуже показанной на рисунке 1 хроматограммы.
Не реже одного раза в месяц, а также при замене реактивов проводят хроматографирование холостой пробы, приготовленной по 7.6, но без добавления липидов. На хроматограмме холостой пробы не должно быть посторонних пиков, кроме пиков бутилокситолуола и метилового эфира трикозановой кислоты (допускаются посторонние пики непосредственно рядом с пиком растворителя).
Подготовку хроматографа и капиллярной колонки (кондиционирование колонки) проводят в соответствии с инструкциями по эксплуатации. При работе с капиллярной колонкой Omegawax 320 устанавливают следующий режим работы хроматографа:
- температура детектора 260 °С;
- температура инжектора 250 °С;
- температура термостата колонки 200 °С;
- давление газа-носителя (азота) в испарителе 85 кПа;
- деление потока газа-носителя в испарителе 1:30;
- расходы водорода, воздуха и азота (поддув в детектор) устанавливают в соответствии с инструкцией к эксплуатации хроматографа или подбирают путем хроматографирования тестовых смесей метиловых эфиров для обеспечения максимальной чувствительности пламенно-ионизационного детектора.
Режимы хроматографа при работе с другими типами капиллярных колонок подбирают так, чтобы качество разделения и время регистрации хроматограмм было не хуже показанной на рисунке 1 хроматограммы.
Не реже одного раза в месяц, а также при замене реактивов проводят хроматографирование холостой пробы, приготовленной по 7.6, но без добавления липидов. На хроматограмме холостой пробы не должно быть посторонних пиков, кроме пиков бутилокситолуола и метилового эфира трикозановой кислоты (допускаются посторонние пики непосредственно рядом с пиком растворителя).
7.6 Отбор и подготовка проб
7.6.1 Отбор проб куриных яиц - по ГОСТ Р 52121, индюшиных, цесариных, перепелиных и страусиных - по ГОСТ Р 53404, яичных продуктов - по ГОСТ Р 53669.
7.6.2 Подготовка проб к испытанию
7.6.2.1 Яйца
В стакан вместимостью 500 см3осторожно разбивают пять-семь куриных или индюшиных яиц или 10-12 перепелиных или цесариных яиц, или два-три страусиных яйца, не допуская попадания в стакан частиц скорлупы. Стеклянной палочкой смешивают желтки с белками и полученную массу гомогенизируют с помощью гомогенизатора или миксера при средней скорости, не допуская вспенивания. Для удаления пленок и мембран гомогенат фильтруют через два слоя марли.
В стакан вместимостью 500 см3осторожно разбивают пять-семь куриных или индюшиных яиц или 10-12 перепелиных или цесариных яиц, или два-три страусиных яйца, не допуская попадания в стакан частиц скорлупы. Стеклянной палочкой смешивают желтки с белками и полученную массу гомогенизируют с помощью гомогенизатора или миксера при средней скорости, не допуская вспенивания. Для удаления пленок и мембран гомогенат фильтруют через два слоя марли.
7.6.2.2 Яичные продукты
Подготовку лабораторных проб яичных продуктов проводят по ГОСТ Р 53669.
Подготовленные пробы хранят до окончания испытания в плотно закрытой стеклянной емкости в холодильнике при температуре от 4 °С до 8 °С.
Подготовку лабораторных проб яичных продуктов проводят по ГОСТ Р 53669.
Подготовленные пробы хранят до окончания испытания в плотно закрытой стеклянной емкости в холодильнике при температуре от 4 °С до 8 °С.
7.6.3 Кислотный гидролиз пробы
Навеску подготовленной по 7.6.2 пробы массой:
- 5 г жидкого меланжа или перемешанного яйца (яичной массы);
- 3 г жидкого желтка;
- 2 г яичного сухого меланжа или сухого желтка взвешивают в конической колбе вместимостью 100 см3 с записью результата взвешивания в граммах до третьего десятичного знака и медленно добавляют с постоянным энергичным встряхиванием колбы 10 см3 неразбавленной (жидкие яичные продукты) или разбавленной (сухие яичные продукты) соляной кислоты (смешивают по объему четыре части концентрированной соляной кислоты и одну часть дистиллированной воды), смывая все частицы яичного продукта, приставшие к стенкам колбы, подсоединяют холодильник и помещают в водяную баню, нагретую до температуры (70±2) °С, доводят до кипения и продолжают кипятить 20 мин, встряхивая колбу через каждые 5 мин. В процессе гидролиза через верхнее отверстие холодильника подают внутрь колбы небольшой поток азота. После окончания гидролиза колбу снимают с водяной бани, добавляют 10 см3 дистиллированной воды и охлаждают до комнатной температуры.
Параллельно из подготовленной по 7.6.2 пробы отбирают навески для определения массовой доли жира по ГОСТ Р 53746.
Навеску подготовленной по 7.6.2 пробы массой:
- 5 г жидкого меланжа или перемешанного яйца (яичной массы);
- 3 г жидкого желтка;
- 2 г яичного сухого меланжа или сухого желтка взвешивают в конической колбе вместимостью 100 см3 с записью результата взвешивания в граммах до третьего десятичного знака и медленно добавляют с постоянным энергичным встряхиванием колбы 10 см3 неразбавленной (жидкие яичные продукты) или разбавленной (сухие яичные продукты) соляной кислоты (смешивают по объему четыре части концентрированной соляной кислоты и одну часть дистиллированной воды), смывая все частицы яичного продукта, приставшие к стенкам колбы, подсоединяют холодильник и помещают в водяную баню, нагретую до температуры (70±2) °С, доводят до кипения и продолжают кипятить 20 мин, встряхивая колбу через каждые 5 мин. В процессе гидролиза через верхнее отверстие холодильника подают внутрь колбы небольшой поток азота. После окончания гидролиза колбу снимают с водяной бани, добавляют 10 см3 дистиллированной воды и охлаждают до комнатной температуры.
Параллельно из подготовленной по 7.6.2 пробы отбирают навески для определения массовой доли жира по ГОСТ Р 53746.
7.6.4 Экстракция липидов
Содержимое колбы переносят в цилиндр вместимостью 100 см3, смывая остатки пробы с колбы в цилиндр с помощью 10 см3 дистиллированной воды. В колбу добавляют 25 см3 диэтилового эфира, встряхивают, промывая стенки колбы, и добавляют в цилиндр. Цилиндр с гидролизованной пробой закрывают стеклянной пробкой и энергично встряхивают с переворачиванием цилиндра в течение примерно 1 мин, периодически открывая пробку для сброса давления. Затем осторожно вынимают пробку и добавляют в цилиндр 25 см петролейного эфира, ополаскивая эфиром пробку и внутреннюю поверхность шлифа. Цилиндр закрывают пробкой и встряхивают с переворачиванием в течение примерно 30 с. Цилиндр оставляют в покое до полного разделения на водную и прозрачную эфирную фазы с четкой границей между ними. Осторожно вынимают пробку, ополаскивают ее и внутреннюю поверхность шлифа с помощью примерно 5 см3 петролейного эфира так, чтобы он стекал в цилиндр. Отбирают как можно больше верхнего эфирного слоя с помощью пипетки вместимостью 20 или 25 см3 и переносят через воронку с безводным сернокислым натрием в грушевидную колбу вместимостью 100 см3, в которую предварительно добавляют несколько кристаллов бутилокситолуола (используют воронку диаметром 56 мм и длиной 80 мм, в нижнюю часть носика которой помещают тампон из обезжиренной стекловаты и насыпают безводный сернокислый натрий слоем высотой примерно 30 мм).
Растворитель из грушевидной колбы отгоняют под вакуумом на ротационном испарителе (перед сбросом давления в кран впуска воздуха подают поток азота) и затем продувают потоком азота до полного исчезновения запаха растворителя. Экстрагированные липиды хранят в плотно закрытой колбе в холодильнике при температуре (6±2) °С не более 24 ч. При необходимости более длительного хранения колбу с экстрагированным жиром хранят в морозильной камере при температуре не выше минус 12 °С (срок хранения - не более одной недели).
На всех этапах подготовки пробы и экстракции жира необходимо предохранять пробу от прямого попадания солнечных и ультрафиолетовых лучей.
Содержимое колбы переносят в цилиндр вместимостью 100 см3, смывая остатки пробы с колбы в цилиндр с помощью 10 см3 дистиллированной воды. В колбу добавляют 25 см3 диэтилового эфира, встряхивают, промывая стенки колбы, и добавляют в цилиндр. Цилиндр с гидролизованной пробой закрывают стеклянной пробкой и энергично встряхивают с переворачиванием цилиндра в течение примерно 1 мин, периодически открывая пробку для сброса давления. Затем осторожно вынимают пробку и добавляют в цилиндр 25 см петролейного эфира, ополаскивая эфиром пробку и внутреннюю поверхность шлифа. Цилиндр закрывают пробкой и встряхивают с переворачиванием в течение примерно 30 с. Цилиндр оставляют в покое до полного разделения на водную и прозрачную эфирную фазы с четкой границей между ними. Осторожно вынимают пробку, ополаскивают ее и внутреннюю поверхность шлифа с помощью примерно 5 см3 петролейного эфира так, чтобы он стекал в цилиндр. Отбирают как можно больше верхнего эфирного слоя с помощью пипетки вместимостью 20 или 25 см3 и переносят через воронку с безводным сернокислым натрием в грушевидную колбу вместимостью 100 см3, в которую предварительно добавляют несколько кристаллов бутилокситолуола (используют воронку диаметром 56 мм и длиной 80 мм, в нижнюю часть носика которой помещают тампон из обезжиренной стекловаты и насыпают безводный сернокислый натрий слоем высотой примерно 30 мм).
Растворитель из грушевидной колбы отгоняют под вакуумом на ротационном испарителе (перед сбросом давления в кран впуска воздуха подают поток азота) и затем продувают потоком азота до полного исчезновения запаха растворителя. Экстрагированные липиды хранят в плотно закрытой колбе в холодильнике при температуре (6±2) °С не более 24 ч. При необходимости более длительного хранения колбу с экстрагированным жиром хранят в морозильной камере при температуре не выше минус 12 °С (срок хранения - не более одной недели).
На всех этапах подготовки пробы и экстракции жира необходимо предохранять пробу от прямого попадания солнечных и ультрафиолетовых лучей.
7.7 Получение метиловых эфиров жирных кислот (метод внутреннего стандарта)
7.7.1 С помощью стеклянной палочки отбирают из колбы экстрагированные липиды (7.6.4), помещают их в предварительно взвешенную фторопластовую реакционную камеру автоклава или стеклянную виалу и взвешивают с записью результата взвешивания в миллиграммах до первого десятичного знака (масса жира должна быть в пределах 40-50 мг). В реакционную камеру автоклава или виалу с навеской липидов вносят 1 см3 раствора метилового эфира трикозановой кислоты и бутилокситолуола в толуоле (см. 7.2). Перемешивают для растворения липидов и добавляют смесь, приготовленную по 7.1. Реакционную камеру помещают в автоклав и закрывают крышкой (виалу плотно закрывают завинчивающейся крышкой с фторопластовой прокладкой). Перед закрыванием емкостей их внутренний объем продувают азотом. Автоклав (виалу) с пробой и смесью по 7.1 помещают в предварительно нагретый до (60±1) °С суховоздушный или жидкостной термостат и выдерживают при этой температуре в течение (80±2) мин, периодически перемешивая содержимое с интервалом примерно 15 мин.
7.7.2 После окончания термостатирования содержимое реакционной камеры или виалы переносят в пробирку вместимостью 25 см3 [можно использовать пробирку, в которой готовилась реакционная смесь (см. 7.1)]. В реакционную камеру или виалу вносят 3 см3 гексана, закрывают крышкой, энергично встряхивают и смыв добавляют в пробирку. В пробирку добавляют 7 см3 водного раствора хлорида натрия массовой долей 10%, закрывают пробкой, энергично встряхивают с переворачиванием в течение 10 с и оставляют до полного разделения фаз. Верхнюю органическую фазу осторожно отбирают с помощью пипетки вместимостью 5 см3 и пропускают через воронку с силикагелем и сернокислым натрием (см. 7.3), предварительно промытой 3-4 см3 гексана (слой силикагеля в воронке должен все время быть смоченным растворителем), собирая фильтрат в пробирку вместимостью 5 см3. После стекания раствора метиловых эфиров из воронки в нее добавляют 2 см3 гексана и фильтрат собирают в эту же пробирку. Окончательный объем раствора метиловых эфиров жирных кислот должен быть примерно 5-6 см3.
Срок хранения полученного раствора метиловых эфиров жирных кислот - 48 ч в холодильнике при температуре (6±2) °С.
Срок хранения полученного раствора метиловых эфиров жирных кислот - 48 ч в холодильнике при температуре (6±2) °С.
7.8 Получение метиловых эфиров жирных кислот (метод внутренней нормализации)
Метиловые эфиры жирных кислот получают по 7.7 со следующим изменением в 7.7.1: в реакционную камеру или виалу с навеской липидов вместо раствора метилового эфира трикозановой кислоты и бутилокситолуола в толуоле вносят 1 см3 раствора бутилокситолуола в толуоле, приготовленного по 7.3.
Метиловые эфиры жирных кислот получают по 7.7 со следующим изменением в 7.7.1: в реакционную камеру или виалу с навеской липидов вместо раствора метилового эфира трикозановой кислоты и бутилокситолуола в толуоле вносят 1 см3 раствора бутилокситолуола в толуоле, приготовленного по 7.3.
8 Проведение измерений
8.1 В испаритель хроматографа вводят 1 мм3 раствора метиловых эфиров жирных кислот, приготовленных по 7.7 (метод внутреннего стандарта) или по 7.8 (метод внутренней нормализации). Хроматографирование проводят дважды. На полученной хроматограмме размечают все пики (кроме пика бутилокситолуола) и с помощью программного обеспечения определяют значения площадей пиков.
9 Обработка результатов
9.1 Идентификация хроматографических пиков
Идентификацию пиков проводят по времени удерживания хроматографических пиков по ГОСТ Р 51483 или путем сравнения хроматограммы пробы с хроматограммой тестовой смеси метиловых эфиров жирных кислот. На рисунке 1 показана хроматограмма метиловых эфиров жирных кислот, типичная для липидов куриных яиц.
Для интерпретации пиков можно воспользоваться приложением Б, в котором приведен характерный для куриных яиц перечень жирных кислот, порядок их выхода на хроматограмме (колонка Omegawax 320) и диапазон значений площадей пиков в процентах по отношению к сумме площадей всех пиков метиловых эфиров жирных кислот.
Сумма относительных площадей не идентифицированных пиков не должна превышать 0,5%. Соответствующее значение должно быть указано в протоколе испытаний.
Идентификацию пиков проводят по времени удерживания хроматографических пиков по ГОСТ Р 51483 или путем сравнения хроматограммы пробы с хроматограммой тестовой смеси метиловых эфиров жирных кислот. На рисунке 1 показана хроматограмма метиловых эфиров жирных кислот, типичная для липидов куриных яиц.
Для интерпретации пиков можно воспользоваться приложением Б, в котором приведен характерный для куриных яиц перечень жирных кислот, порядок их выхода на хроматограмме (колонка Omegawax 320) и диапазон значений площадей пиков в процентах по отношению к сумме площадей всех пиков метиловых эфиров жирных кислот.
Сумма относительных площадей не идентифицированных пиков не должна превышать 0,5%. Соответствующее значение должно быть указано в протоколе испытаний.
 | |
| 686 × 544 пикс. Открыть в новом окне | |