5.2.9 Приготовление среды Сабуро
(
) г агара добавляют к 1000 
дистиллированной воды в конической колбе вместимостью 2000 
и оставляют на (
) мин для его набухания. К набухшему агару добавляют (
) г мальтозы или глюкозы и 10 г пептона, нагревают до полного растворения и фильтруют. Устанавливают активную кислотность от 6,4 до 6,6 рН добавлением молочной кислоты, разливают в пробирки или колбы и стерилизуют при (
)°С в течение (
) мин.
) г агара добавляют к 1000 дистиллированной воды в конической колбе вместимостью 2000 и оставляют на ( ) мин для его набухания. К набухшему агару добавляют ( ) г мальтозы или глюкозы и 10 г пептона, нагревают до полного растворения и фильтруют. Устанавливают активную кислотность от 6,4 до 6,6 рН добавлением молочной кислоты, разливают в пробирки или колбы и стерилизуют при ( )°С в течение ( ) мин. 5.2.10 Приготовление среды промышленного производства для определения дрожжей и плесневых грибов в молоке и молочных продуктах
Среду готовят по [11] и используют только в производственных лабораториях.
5.2.11 Для повышения селективности питательных сред добавляют растворы антибиотиков в объеме, указанном в таблице 1.
Таблица 1 - Схема добавления растворов антибиотиков в питательные среды
Объем питательной среды,  | Объем добавляемых к среде растворов антибиотиков,  | ||
пенициллин | стрептомицин | левомицетин | |
980 | 10 | 10 | - |
975 | - | - | 25 |
5.2.11.1 Приготовление стерильной дистиллированной воды
Дистиллированную воду разливают в колбы или пробирки в необходимом количестве и стерилизуют при (
)°С в течение (
) мин.
)°С в течение ( ) мин. 5.2.11.2 Приготовление раствора пенициллина активностью 5000 
Во флакон с пенициллином активностью 500000 БД добавляют от 5 до 7 
стерильной дистиллированной воды и перемешивают до полного растворения. Содержимое флакона переносят в стерильную мерную колбу вместимостью 100 
, доводят до метки стерильной дистиллированной водой температурой от 35 до 40°С и перемешивают.
стерильной дистиллированной воды и перемешивают до полного растворения. Содержимое флакона переносят в стерильную мерную колбу вместимостью 100 , доводят до метки стерильной дистиллированной водой температурой от 35 до 40°С и перемешивают. При использовании пенициллина другой активности делают пересчет.
5.2.11.3 Приготовление раствора стрептомицина массовой концентрации 4 
(
) мг стрептомицина вносят в стерильную мерную колбу вместимостью 100 
, добавляют от 10 до 20 
стерильной дистиллированной воды температурой от 35 до 40°С, перемешивают до полного растворения и доводят той же водой до метки.
) мг стрептомицина вносят в стерильную мерную колбу вместимостью 100 , добавляют от 10 до 20 стерильной дистиллированной воды температурой от 35 до 40°С, перемешивают до полного растворения и доводят той же водой до метки. 5.2.11.4 Приготовление раствора левомицетина (хлорамфеникола) массовой концентрации 4 
(
) мг левомицетина вносят в стерильную мерную колбу вместимостью 100 
, добавляют от 10 до 20 
стерильной дистиллированной воды температурой от 35 до 40°С, перемешивают до полного растворения и доводят той же водой до метки.
) мг левомицетина вносят в стерильную мерную колбу вместимостью 100 , добавляют от 10 до 20 стерильной дистиллированной воды температурой от 35 до 40°С, перемешивают до полного растворения и доводят той же водой до метки. 5.2.11.5 Водные растворы антибиотиков готовят непосредственно перед применением. Их вносят в расплавленную и охлажденную до (
)°С питательную среду.
)°С питательную среду. Среды с антибиотиками готовят перед применением.
5.2.12 Среды проверяют на стерильность путем выдержки в термостате при (
)°С в течение 48 ч. Если после этого на плотных питательных средах не обнаруживается колоний микроорганизмов, они считаются стерильными.
)°С в течение 48 ч. Если после этого на плотных питательных средах не обнаруживается колоний микроорганизмов, они считаются стерильными. 5.2.13 Сроки и условия хранения питательных сред
Плотные питательные среды хранят при (
)°С не более 1 мес, при (
)°С не более 2 мес, жидкие питательные среды и растворы - не более 14 сут при (
)°С.
)°С не более 1 мес, при ( )°С не более 2 мес, жидкие питательные среды и растворы - не более 14 сут при ( )°С.6 Порядок проведения определений
6.1 Приготовление разведений продуктов для посева
6.1.1 Приготовление разведений 1:10 (первое разведение)
Отобранные пробы продуктов. перемешивают до полного растворения и готовят первое разведение.
6.1.1.1 Из проб жидких пастеризованных, стерилизованных и кисломолочных продуктов отбирают стерильной пипеткой 10 
продукта, вносят в колбу с 90 
одного из растворов, приготовленного по 5.2.3, и перемешивают круговыми движениями от 3 до 5 мин. При этом пипетку промывают до 10 раз раствором этого продукта до верхнего уровня имеющихся на ней делений.
продукта, вносят в колбу с 90 одного из растворов, приготовленного по 5.2.3, и перемешивают круговыми движениями от 3 до 5 мин. При этом пипетку промывают до 10 раз раствором этого продукта до верхнего уровня имеющихся на ней делений. Пробы кисломолочных продуктов перед разведением нейтрализуют. Для этого отбирают стерильной пипеткой 10 
, продукта в стерильную посуду, добавляют 1 
стерильного водного раствора двууглекислого натрия массовой концентрации 0,1 
и перемешивают.
, продукта в стерильную посуду, добавляют 1 стерильного водного раствора двууглекислого натрия массовой концентрации 0,1 и перемешивают. 6.1.1.2 Из проб творога, творожных изделий и пастообразных продуктов взвешивают (
) г продукта на стерильном часовом стекле, чашки Петри или в бюксе, переносят в стерильную или фламбированную ступку, прикрытую крьпшсой от чашки Петри, растирают, постепенно добавляя 90 
одного из растворов, приготовленного по 5.2.3.
) г продукта на стерильном часовом стекле, чашки Петри или в бюксе, переносят в стерильную или фламбированную ступку, прикрытую крьпшсой от чашки Петри, растирают, постепенно добавляя 90 одного из растворов, приготовленного по 5.2.3. При посеве продуктов без разведений их нейтрализуют по 6.1.1.1.
6.1.1.3 Из проб сгущенных продуктов взвешивают (
) г продукта в стерильной колбе, приливают в нее 90 
одного израстворов, приготовленного по 5.2.3 и перемешивают до полного растворения.
) г продукта в стерильной колбе, приливают в нее 90 одного израстворов, приготовленного по 5.2.3 и перемешивают до полного растворения. 6.1.1.4. Из проб сухих продуктов взвешивают (
) г продукта на кусочке стерильного пергамента на чашке Петри, в бюксе или на часовом стекле. Взвешенную пробу переносят в колбу с 90 
одного из растворов, приготовленного по 5.2.3 и подогретого до температуры от 40 до 45°С.
) г продукта на кусочке стерильного пергамента на чашке Петри, в бюксе или на часовом стекле. Взвешенную пробу переносят в колбу с 90 одного из растворов, приготовленного по 5.2.3 и подогретого до температуры от 40 до 45°С. 6.1.1.5 Для получения однородной взвеси продукта допускается перемешивание на аппарате для встряхивания жидкостей от 5 до 7 мин, избегая намокания пробок.
6.1.2 Приготовление разведения 1:100 (второе разведение)
6.1.2.1 Из первого разведения продукта стерильной пипеткой берут 1 
и переносят в пробирку с 9 
одного из растворов; приготовленного по 5.2.3, перемешивают осторожно, набирая и выдувая раствор из пипетки от 5 до 10 раз.
и переносят в пробирку с 9 одного из растворов; приготовленного по 5.2.3, перемешивают осторожно, набирая и выдувая раствор из пипетки от 5 до 10 раз. 6.1.2.2 Для приготовления разведений сухих молочных каш для детского: питания используют надосадочную жидкость первого разведения продукта после отстаивания, его от 1 до 3 мин.
6.1.2.3 В зависимости от предполагаемого обсеменения, продукта последующие разведения 1:1000, 1:10000 и т.д. готовят аналогично.
6.1.2.4 Для приготовления каждого разведения используют отдельно, взятую стерильную пипетку, вводя ее в пробирку ниже уровня поверхности взвеси от 2 до 3 см.
Время от момента приготовления разведений до посева не должно превышать 30 мин. Перед посевом все разведения осторожно встряхивают. При посеве на чашки Петри или в пробирки посевной материал вносят от большего разведения к меньшему, пользуясь при этом одной пипеткой.
6.2 Посев на чашки
Перед посевом чашки маркируют. На две чашки карандашом по стеклу ставят номер исследуемого образца продукта, разведение и дату.
По 1 
продукта или каждого соответствующего его разведения вносят в 2 чашки Петри (параллельные определения). Пипетку с посевным материалом держат под углом 45°, касаясь концом пипетки дна чашки, не выдувая последнюю каплю из пипетки. В каждую чашку вносят от 15 до 20 
питательной среды, расплавленной на водяной бане и охлажденной до (
)°С.
продукта или каждого соответствующего его разведения вносят в 2 чашки Петри (параллельные определения). Пипетку с посевным материалом держат под углом 45°, касаясь концом пипетки дна чашки, не выдувая последнюю каплю из пипетки. В каждую чашку вносят от 15 до 20 питательной среды, расплавленной на водяной бане и охлажденной до ( )°С. Края колб с питательной средой перед каждой заливкой фламбируют в пламени газовой горелки или спиртовки. Сразу после заливки среды содержимое чашки Петри тщательно перемешивают путем легкого вращательного покачивания для равномерного распределения посевного материала.
6.3 Инкубация
После застывания среды чашки Петри переворачивают крышками вниз и помещают в таком виде в термостат при (
)°С на (
) ч. Допускается предварительный учет количества выросших колоний через (
) ч с последующим окончательным учетом еще через (
) ч.
)°С на ( ) ч. Допускается предварительный учет количества выросших колоний через ( ) ч с последующим окончательным учетом еще через ( ) ч. Чашки Петри с посевами распределяют в термостате таким образом, чтобы каждая их группа отделялась от соседних чашек, от верха и стенок термостата не менее чем на 3 см.
7 Правила обработки и оформления результатов определения
7.1 Обработка результатов
7.1.1 Количество выросших колоний подсчитывают на перевернутой вверх дном чашке, поместив ее на темном фоне, пользуясь лупой с увеличением от 4 до 10 раз. Каждую подсчитанную колонию отмечают на дне чашки чернилами.
Подсчет колоний дрожжей и плесневых грибов производят раздельно. Рекомендуется пользоваться прибором для подсчета колоний бактерий.
Рост дрожжей на агаризованных средах сопровождается образованием крупных, выпуклых, блестящих, серовато-белых колоний с гладкой поверхностью и ровным краем.