Руководящий документ РД 52.10.243-92 "Руководство по химическому анализу морских вод" (утв. решением Комитета по гидрометеорологии и мониторингу окружающей среды от 28 апреля 1992 г.) стр. 68

Капиллярную колонку с жидкой фазой подсоединяют к испарителю и детектору хроматографа в соответствии с инструкцией по эксплуатации прибора. Об окончании кондиционирования судят по отсутствию или неизменности уровня шумов и дрейфа нулевой линии самописца при рабочей температуре и выбранной чувствительности.

Условия хроматографирования: скорость газа-носителя (гелия, азота) на выходе из колонки - 20...30 см/с; скорость подачи водорода - 30, воздуха - 300 мл/мин; температура испарителя - 280...300°С, детектора - 350°С, начальная температура термостата - 40...80°С; температурная программа: изотерма 1,5-3 мин при начальной температуре, далее - линейное программирование с шагом 4-6°С до конечной температуры 270-300°С, после чего - изотермический режим до полного выхода компонентов (около 30 мин); чувствительность средняя; объем пробы, вводимой шприцем, - 0,5...1,5 мкл; делитель потока 1:50; скорость ленты самописца - 1 см/мин.

Один раз в год или при необходимости чаще хроматограф поверяется по контрольным растворам н-алканов, например . Если при этом коэффициенты разделения, число теоретических тарелок и высота эквивалентной теоретической тарелки воспроизводятся в пределах , то прибор пригоден к работе.

7. Выполнение измерений

7.1. Спектрофлуорометрия

Чистую и сухую кювету наполняют АР термообработанного НП с концентрацией около 20 мкг/мл и, убедившись в чистоте внешних поверхностей, устанавливают в cветодержатель подготовленного к работе спектрофлуорометра. При нм сканируют вручную по всему интервалу 250-500 нм, следя за отклонением пера самописца при выключенной диаграммной ленте. Найдя флуоресценции, устанавливают это значение приблизительно на уровне 80% ширины ленты, варьируя чувствительность. Закрывают шторку, жидкость в кювете заменяют новой порцией того же АР, монохроматор эмиссии устанавливают на начальное значение 250 нм. Повторно сканируют в автоматическом режиме, предварительно включив диаграммную ленту. Записывают спектр (типичная спектрофлуорограмма нефти приведена на рис. 28а). Флуорометрирование образцов производят по 3 раза, причем каждый раз с новой порцией АР. Затем устанавливают нм и повторяют всю вышеописанную работу, получают спектрофлуорограмму (рис. 28б, прибор FP-550 фирмы "Джаско", Япония; чувствительность - х1/10, постоянная времени - 1 с).

7.2. Жидкостная хроматография высокого давления

Аналитические растворы готовят растворением "сухих остатков", осветленных НП, получаемых согласно п. 4.3, в 0,5-1,0 мл гексана.

Заполняют насос вышедшего на режим жидкостного хроматографа элюентом, устанавливают скорость подачи 0,1-0,5 мл/мин. С помощью устройства ввода проб вводят в колонку заданный объем АР в интервале 0,8-5,0 мкл, затем включают насос, ленту самописца, отметчик объема элюата. Поступая согласно инструкции к прибору, начинают хроматографирование образца, которое ведут до выхода всех компонентов его состава. Хроматографирование каждого "сухого остатка" проводят 2-3 раза. Типичная хроматограмма дизельного топлива представлена на рис. 29 (прибор "Милихром-1", колонка 64х2 мм с силасорбом 600 зернением 5 мкм; чувствительность 0,60; постоянная времени 0,15 с; расход элюента гексана 0,1 мл/мин.; нм).

7.3. Капиллярная газовая хроматография

Вводят в испаритель готового к работе хроматографа 1 мкл градуировочного раствора н-алканов , приготовленного растворением 5-15 мг алканов в 5 мл гексана и разбавлением раствора приблизительно в 100 раз. Одновременно с вводом пробы запускают программу анализа, по окончании которого получают хроматограмму. Значения времени удерживания н-алканов должны прямо пропорционально зависеть от числа атомов C в углеводородах. Эту градуировочную хроматограмму в дальнейшем используют для соотнесения пиков на хроматограммах исследуемых НП из разлива и от источника.

Анализируют либо термообработанные образцы НП, либо "сухие остатки" осветленных НП в виде растворов, например в гексане, хлороформе, концентрацией 0,1-5 мг/мл. Вводят в хроматограф около 1 мкл АР и одновременно запускают программу. По окончании программы получают хроматограммы вида, изображенного на рис. 30 (прибор "Vista 6000" фирмы Вариан, США). Хроматографирование каждого образца производят 2-3 раза, а одного из них с наиболее полным набором н-алканов (контрольный образец) - 5-8 раз для установления показателя воспроизводимости результатов хроматографического анализа.

8. Обработка результатов

8.1. Вычисление результатов измерений

8.1.1. Спектрофлуорограммы НП (см. рис. 28) характеризуют: 1) контуром (общей формой); 2) максимумов эмиссии; 3) числом максимумов и плеч; 4) отношением высот при максимумах (средним арифметическим по трем спектрам). Если совпадают первые три параметра сравниваемых спектрограмм и соизмеримы - в пределах , то НП в первом приближении считают соответствующими друг другу. При несовпадении всех четырех параметров НП считают несоответствующими. В промежуточных случаях результаты полагают неопределенными.

8.1.2. Жидкостные хроматограммы (см. рис. 29) характеризуют:

1) контуром; 2) числом пиков ("веществ"); 3) временами выхода (объемами удерживания) "веществ"; 4) отношением высот пиков. При совпадении двух первых характеристик и соизмеримости в пределах средних арифметических значений 3-го и 4-го параметров считают, что сравниваемые НП соответствуют друг другу по типу. При несовпадении параметров НП полагают несоответствующими.

8.1.3. На типичных капиллярных газовых хроматограммах (см. рис. 30) видны сигналы (линии) н- и изоалканов ("забор") на выпуклом фоне совокупности неподеленных компонентов ("горбе"). В большинстве случаев контуры "забора" и "горба" специфичны, поэтому при сильном различии контуров можно констатировать несоответствие характеризуемых ими образцов. В отсутствии явно выраженного несходства внешнего вида хроматограммы подвергают детальному исследованию. Последнее заключается в следующем.

На двух-трех хроматограммах одного и того же АР находят идентичные сигналы и определяют их интенсивности (высоты пиков) h с точностью 0,5 мм, отсчитывая от истинной нулевой линии (рис. 30). Вычисляют среднеарифметические значения h. Аналогично определяют средние высоты пиков Н реперного НП. Затем находят отношения высот идентичных пиков (с одинаковым временем удерживания) , , ... и т.д. НП считают соответствующими друг другу, если не менее 75% отношений соизмеримы с точностью . Отсутствие единичных пиков или, напротив, их наличие сверх пиков хроматограммы репера необязательно свидетельствует о несоответствии сравниваемых НП.

Хотя при сравнительном исследовании нет необходимости знать, каким конкретным соединениям (углеводородам) принадлежат те или иные пики, и идентификацию НП можно с успехом проводить "вслепую", т.е. так, как описано выше, иногда рационально оперировать "именными отношениями" (например, при представлении результатов интеркалибраций). Расшифровку пиков осуществляют на основе хроматограмм градуировочных смесей стандартных соединений н-алканов . Хроматографирование этих смесей производят строго в условиях, принятых в работе по идентификации разливов (см. п. 7.3). Соотнесения в хроматограммах пиков других алканов, не представленных в искусственной смеси, устанавливают, используя закон неизменности разностей времен удерживания любой пары н-алканов при линейном программировании температуры.

Зная, каким алканам соответствуют пики на хроматограммах сравниваемых НП, и определив высоты этих пиков, вычисляют отношения : , , , и т.д., а также и . Кроме приведенных, можно использовать и другие : например , фитан/пристан и т.д.*

Далее вычисляют относительное расхождение Р:

, (1)

где - отношение для НП из разлива; - отношение для реперного НП (от возможного источника); у - число отношений.

Если , то образцы соответствуют; если Р > 15, то не соответствуют. Это условие выполняется в том случае, когда относительная погрешность расчета (показатель воспроизводимости ) для контрольного образца с вероятностью 0,95 не превышает 10%.

8.2. Представление результатов идентификации

Вывод о соотнесении сравниваемых образцов НП из разлива и от возможного источника делается на основе комплексного сопоставления результатов анализов (скрининга и идентификации) в соответствии с табл. 50.

Таблица 50

Варианты соотнесения образцов НП

Тип сравниваемой пары НП	Результаты скрининга		Результат идентификации	Вывод
	СФ	ЖХВД
I	+	+ или	+	+
II	+	- или	+	+
III	+	-	-	-
IV	-	0	0	-

Примечание. "+" - образцы пары НП соответствуют; "-" - образцы пары НП не соответствуют; " " - результат неопределенный; "0" - исследование не проводят.

При проведении работы по идентификации НП согласно настоящей СИ могут быть случаи, когда вполне определенный вывод сделать невозможно. В таких случаях рекомендуется применять иные методы скрининга (например, по содержанию никеля и ванадия) и идентификации (например, хроматомасс-спектрометрию), описанные в других СИ.

9. Требования к квалификации аналитика

Работу по идентификации могут выполнять опытные инженер-химик и техник-химик при консультативной помощи научных сотрудников - специалистов по спектрометрии и хроматографии.

10. Нормы затрат рабочего времени на анализ

На проведение исследования 10 образцов НП требуется 75 чел.-ч, в том числе:

на взятие проб - 0,5 чел.-ч;

на подготовку посуды - 3 чел.-ч;

на сборку установок - 2 чел.-ч;

на термообработку - 20 чел.-ч;

на работу, связанную с выветриванием образцов, - 1 чел.-ч;

на осветление образцов - 12 чел.-ч;

на подготовку средств измерений к работе - 4,5 чел.-ч;

на выполнение измерений:

скрининг методом СФ - 4 чел.-ч;

скрининг методом ЖХВД - 4 чел.-ч;

КГХ идентификация - 15 чел.-ч;