Стаканы стеклянные В-1-150, В-1-200 ТС или ТХС по ГОСТ 25336.
Пробирки пластиковые.
Палочки стеклянные или пластиковые.
Допускается применение других средств измерений с метрологическими характеристиками и оборудования с техническими характеристиками, а также реактивов по качеству не ниже вышеуказанных.
5.2.14.2 Подготовка к проведению анализа
5.2.14.2.1 Подготовка пробы анализируемого образца патоки
Для анализа готовят 1%-ный раствор патоки в пересчете на сухое вещество. Для этого определяют массовую долю сухого вещества патоки по 5.2.4 или 5.2.5 и вычисляют массу навески , г, необходимую для приготовления 1%-ного раствора по формуле
, | (20) |
где - массовая доля сухого вещества патоки, %;
100 - пересчет на сухое вещество патоки, %;
1 - массовая доля сухого вещества в 100 г 1%-ного раствора, г.
Стакан с палочкой помещают на весы и устанавливают нуль, взвешивают массу навески патоки, определенную по формуле (16) с погрешностью г, и приливают теплую бидистиллированную воду до г. Палочкой тщательно перемешивают раствор до полного растворения патоки. Приготовленный раствор фильтруют через мембранный фильтр в сухую чистую пробирку или в виалу автосэмплера.
Подготовленную пробу анализируют в течение 1-2 ч после приготовления.
Подготовленная проба может храниться в течение 3 мес в замороженном виде.
5.2.14.2.2 Приготовление стандартных растворов для определения времени удержания углеводов
Стандартные 1%-ные растворы углеводов (фруктозы, глюкозы, мальтозы и мальтотриозы), а также их смеси готовят на бидистиллированной воде. В стеклянный стакан помещают навеску углевода, взятую с учетом содержания основного компонента реактива, приливают 10-15 воды, растворяют и количественно переносят в мерную колбу вместимостью 50 , доводят его объем водой до метки при температуре раствора 20°С. Приготовленные растворы фильтруют через мембранные фильтры в пластиковые пробирки. Пробирки закрывают крышками и замораживают в холодильнике. В замороженном состоянии растворы углеводов хранят до одного года. Перед началом работы растворы размораживают, используя для этого теплую воду или микроволновую печь в режиме размораживания.
5.2.14.2.3 Определение времени удержания углеводов и оценка эффективности разделения
Включают хроматограф и настраивают его согласно инструкции по эксплуатации, Скорость потока элюента, температуру термостата колонки устанавливают в соответствии с рекомендациями, приведенными в паспорте на хроматографическую колонку. Температура термостата детектора °С.
Для идентификации пиков углеводов необходимо определить время удержания углеводов. Для этого поочередно анализируют стандартные растворы углеводов и их смесь.
Рекомендуется для определения времени удержания, вычисления площадей пиков и расчетов применять интеграторы или компьютерные системы обработки хроматографических данных.
Относительное время Tx, с, удержания каждого углевода (х) вычисляют по формуле
, | (21) |
где tx - абсолютное время удержания каждого углевода, с;
- абсолютное время удержания глюкозы, с.
Эффективность хроматографической колонки по глюкозе, теоретические тарелки а вычисляют по формуле
, | (22) |
где - абсолютное время удержания глюкозы, с;
- ширина пика на уровне 50% высоты, с;
5,54 - коэффициент.
Эффективность хроматографической колонки по глюкозе должна быть не менее 2000 теоретических тарелок.
5.2.14.3 Обработка и оформление результатов измерений
Проводят два параллельных определения.
5.2.14.3.1 После получения хроматограммы проводят обработку данных методом внутренней нормализации по формуле
, | (23) |
где - массовая доля углевода х в пробе, %;
- площадь пика углевода х;
- сумма площадей всех пиков углеводов.
Результаты вычислений записывают до первого десятичного знака.
За окончательный результат определения принимают среднеарифметическое значение двух параллельных определений, округленное до целого числа.
Предел повторяемости (сходимости) r - абсолютное значение разности между результатами двух измерений, полученными в условиях повторяемости при Р = 95%, не должен превышать 0,5%.
Предел воспроизводимости R - абсолютное значение разности между результатами двух измерений, полученными в условиях воспроизводимости при Р = 95%, не должен превышать 1,5%.
Граница абсолютной погрешности метода % при Р = 95%.
Результат анализа в документах, предусматривающих его использование, представляют в виде
, при Р = 0,95,
где - среднеарифметическое двух измерений, выполненных в условиях повторяемости, %;
- значение границ абсолютной погрешности результата анализа при P = 95%, 96.
5.2.14.3.2 Расчетный метод определения массовой доли редуцирующих веществ по данным углеводного состава
Метод применим при массовой доле редуцирующих веществ 26% - 90%. Результаты определения углеводного состава патоки позволяют вычислить массовую долю редуцирующих веществ патоки , %, в пересчете на сухое вещество по формуле
(24)
где - массовые доли углеводов: глюкозы, фруктозы, мальтозы, триозы в пересчете на сухое вещество, %;