Допускается определение ацетоина проводить без применения раствора креатина. Для этого после инкубирования к 1 
отобранной культуральной жидкости прибавляют 0,6 
раствора 1-нафтола и 0,2 
раствора гидроокиси калия, содержимое пробирки перемешивают после прибавления каждого реактива.
отобранной культуральной жидкости прибавляют 0,6 раствора 1-нафтола и 0,2 раствора гидроокиси калия, содержимое пробирки перемешивают после прибавления каждого реактива. Появление розового окрашивания через 15 мин указывает на положительную реакцию.
8.5.3.6 Определение подвижности
Культуры пересевают уколом в полужидкий питательный агар (5.2.17) или полужидкий мясо-пептонный агар (5.2.18).
Посевы инкубируют при температуре (37
1)°С в течение (24
2) ч.
1)°С в течение (24 2) ч. При росте подвижных культур отмечается диффузионный рост по всему столбику агара, при росте неподвижных культур - вдоль места укола.
Бактерии рода Shigella неподвижны.
8.5.3.7 Определение утилизации цитрата
Культуру высевают в пробирки со средой Козера (5.2.13) или на поверхность среды Симмонса (5.2.14). Посевы инкубируют при температуре (37
1)°С в течение 24-48 ч. Изменение оливково-зеленого цвета сред на васильковый (или синий) указывает на положительную реакцию.
1)°С в течение 24-48 ч. Изменение оливково-зеленого цвета сред на васильковый (или синий) указывает на положительную реакцию. Бактерии рода Shigella не утилизируют цитрат.
8.5.3.7 Интерпретация биохимических тестов приведена в таблице Г.1 приложения Г.
8.5.4 Серологическое подтверждение
8.5.4.1 Общие положения
Определение присутствия антигенов у изучаемых культур (8.5.2) проводят путем постановки реакции агглютинации на предметном стекле с соответствующими сыворотками после исключения самоагглютинирующих штаммов. Сыворотки используют в соответствии с инструкцией изготовителя, если есть отличие от описания, приведенного ниже.
Серологическое подтверждение принадлежности к бактериям рода Shigella проводят с культурами, предварительно пересеянными на поверхность питательного агара, мясо-пептонного агара или ГРМ-агара.
8.5.4.2 Исключение самоагглютинирующих штаммов
Помещают каплю физиологического раствора на тщательно очищенное предметное стекло. Диспергируют в этой капле часть тестируемой колонии так, чтобы получилась гомогенная и густая суспензия.
Допускается размешивание части колонии в капле воды и перемешивании этого раствора с одной каплей физиологического раствора.
Стекло осторожно покачивают в течение 30-60 с. Отмечают результаты на темном фоне, лучше с помощью увеличительного стекла. Если наблюдается в разной степени склеивание бактерий, то есть образование осадка, то считают, что тестируемая культура бактерий обладает самоагглютинацией.
Штаммы бактерий, обладающие самоагглютинацией, не подвергают дальнейшему серологическому испытанию.
8.5.4.3 Определение наличия антигенов
Культуры бактерий, у которых не выявлено самоагглютинации, испытывают в реакции агглютинации с агглютинирующими адсорбированными поливалентными шигеллезными сыворотками.
Подготовка сывороток к постановке реакции агглютинации и методика ее проведения указаны в инструкциях, прилагаемых к сывороткам.
Агглютинация (наличие О-антигенов) проявляется в виде склеивания бактериальной массы и полного или частичного просветления жидкости.
При отрицательной реакции агглютинации культура после тщательного смешивания с каплей сыворотки образует гомогенную смесь.
Используют поливалентные сыворотки, одну после другой.
8.5.5 Интерпретация биохимических и серологических тестов
Интерпретация подтверждающих тестов (8.5.3 и 8.5.4) для испытанных культур бактерий (8.5.2) представлена в таблице 1.
Таблица 1 - Интерпретация подтверждающих тестов
Биохимические реакции | Самоагглютинация | Серологические реакции | Интерпретация |
| Типичные | Нет | Антигены обнаружены | Штамм относится к бактериям рода Shigella |
| Типичные | Нет | Антигены не обнаружены | Могут быть отнесены к бактериями рода Shigella |
| Типичные | Да | Не тестируется (см. 8.5.4.2) | |
| Нетипичные реакции | Нет/Да | Антигены обнаружены | |
| Нетипичные реакции | Нет/Да | Антигены не обнаружены | Не могут быть отнесены к бактериям рода Shigella |
При определении биохимических и серологических тестов выделенных культур в качестве контроля используют типичные по этим показателям штаммы бактерий рода Shigella, указанные в разделе 6.
Культуры, предположительно отнесенные к бактериям рода Shigella, передают в компетентные аккредитованные центры по изучению этих бактерий для окончательного их типирования. Культуру при этом сопровождают всей полученной информацией с указанием наименования продукта, из которого выделен штамм.
В этом случае результаты выявления бактерий рода Shigella выдают после получения ответа по окончательному их типированию.
9 Обработка результатов
9.1 Результаты оформляют по каждой лабораторной пробе отдельно.
9.2 Результаты выявления бактерий рода Shigella в определенной массе или объеме продукта записывают: "Бактерии рода Shigella обнаружены (не обнаружены) в Х г (
) пищевого продукта".
) пищевого продукта". X - масса (объем) анализируемой пробы пищевого продукта, в которой выявляли бактерии рода Shigella, г (
).
).10 Протокол испытания
Протокол испытания должен включать следующее:
- используемый метод отбора проб;
- использование каких-нибудь отклонений в методе обогащения или инкубации;
- все условия испытания, не включенные в настоящий стандарт, а также причины, которые могут влиять на результаты;
- полученные результаты.
11 Требования безопасности
Требования безопасности выполнения работ и квалификации оператора - по ГОСТ Р ИСО 7218, [1].
Приложение А
(обязательное)
(обязательное)
Состав и приготовление питательных сред и растворов реактивов
А.1 Вода пептонная забуференная
А.1.1 Состав
| Пептон, г | 10,0 |
| Натрий хлористый (NaCI), г | 5,0 |
Натрий фосфорнокислый двузамещенный 12-водный ( ), г | 9,0 |
Калий фосфорнокислый однозамещенный ( ), г | 1,5 |
Вода,  | 1000 |