А.1.2 Приготовление
При нагревании растворяют компоненты в воде. Устанавливают рН так, чтобы после стерилизации он составлял (7,0 0,2) при температуре 25°С. Разливают среду во флаконы подходящей вместимости с учетом добавления необходимой массы (объема) пробы пищевого продукта (если масса равна 25 г, то разливают по 225 , то есть в соотношении 1:10). Стерилизуют в автоклаве при температуре (121 1)°С в течение 15 мин.
А.2 Среда обогатительная селективная: бульон для бактерий рода Shigella
А.2.1 Основа среды
Гидролизат казеина ферементативный, г | 20,0 |
Натрий хлористый, г | 5,0 |
Калий фосфорнокислый двузамещенный, г | 2,0 |
Калий фосфорнокислый однозамещенный, г | 2,0 |
Глюкоза, г | 1,0 |
Твин-80, г | 1,5 |
Вода, | 1000 |
При нагревании и частом помешивании растворяют в 1 воды дегидратированные компоненты или 31,5 г дегидратированной основы.
Устанавливают рН так, чтобы после стерилизации он составлял (7,0 0,2) при температуре 25°С. Разливают среду во флаконы. Стерилизуют при температуре (121 1)°С в течение 15 мин, охлаждают до 45-50°С и с соблюдением правил асептики добавляют на 1 среды 5 раствора селективной добавки, приготовленной по А.2.2. Тщательно перемешивают и мерно разливают в стерильную посуду (флаконы или колбы, или пробирки). Готовая среда должна быть прозрачной и иметь светло-янтарную окраску.
А.2.2 Добавка селективная
А.2.2.1 Состав
Новобиоцин, мг | 55 |
Вода, | 5 |
А.2.2.2 Приготовление
С соблюдением правил асептики растворяют новобиоцин в стерильной воде, тщательно перемешивают. Антибиотик новобиоцин подавляет рост грамположительных и некоторых грамотрицательных бактерий.
А.3 Среды агаризованные селективно-диагностические
А.3.1 Первая среда: агар ксилоза лизин дезоксихолатный (XLD агар)
А.3.1.1 Основа среды
А.3.1.1.1 Состав
Экстракт дрожжевой (порошок), г | 3,0 |
Натрий хлористый, г | 5,0 |
Ксилоза, г | 3,5 |
Лактоза, г | 7,5 |
Сахароза, г | 7,5 |
L-лизин гидрохлорид, г | 5,0 |
Тиосульфат натрия, г | 6,8 |
Железо III аммоний цитрат, г | 0,8 |
Феноловый красный, г (или 20 раствора, приготовленного по А.3.1.2, если среду готовят из отдельных компонентов) | |
0,08 | |
Натрий дезоксихолат, г | 2,5 |
Агар, г (зависит от желирующих свойств) | 9,0-18,0 |
Вода, | 1000 |
А.3.1.1.2 Приготовление
При нагревании и частом помешивании растворяют дегидратированые компоненты основы или дегидратированную основу в воде.
Доводят до кипения, но не кипятят, избегая перегрева. Устанавливают рН так, чтобы после прогрева он составлял (7,4 0,2) при температуре 25°С. Разливают основу во флаконы подходящей вместимости. Затем прогревают на кипящей водяной бане около 5 мин.
А.3.1.2 Раствор фенолового красного
А.3.1.2.1 Состав
Феноловый красный, г | 0,4 |
Вода, | 100 |
А.3.1.2.2 Приготовление
Феноловый красный переносят в фарфоровую ступку и постепенно растворяют в воде. Раствор переливают в мерную колбу вместимостью 100 и доводят водой до метки. Раствор хранят в закрытом сосуде из темного стекла при комнатной температуре.
А.3.1.3 Приготовление чашек Петри с агаром
После прогрева среду помещают в водяную баню при температуре 44 - 47°С, затем перемешивают и разливают приблизительно по 15 в стерильные чашки Петри. Дают затвердеть.
Чашки со средой хранят в холодильнике при температуре (3 2)°С не более 5 сут.
Перед использованием подсушивают (приблизительно 30 мин) поверхность агара в чашках Петри (предпочтительней с открытой крышкой и поверхностью агара вниз) в шкафу или термостате с температурой 37 - 55°С до тех пор, пока поверхность агара не станет сухой.
А.3.2 Вторая среда:
А.3.2.1 Среда Плоскирева.
А.3.2.2 Среда Эндо.
А.3.2.3 Среда Левина.
А.3.2.4 Агар сальмонелла-шигелла.
А.3.2.5 Агар дезоксихолатный цитратный.
А.3.2.6 Агар висмут-сульфитный.
Среды готовят в соответствии с рекомендациями, указанными на этикетке.
А.4 Агар питательный или ГРМ-агар
А.4.1 Состав
Экстракт мясной, г | 3,0 |
Пептон, г | 5,0 |
Агар, г (зависит от желирующих свойств) | 9,0 - 18,0 |
Вода, | 1000 |
А.4.2 Приготовление
При нагревании растворяют компоненты в воде. Устанавливают рН так, чтобы после стерилизации он составлял (7,4 0,2) при температуре 25°С. Переносят питательную среду в пробирки или флаконы, стерилизуют в автоклаве при температуре (121 1)°С в течение 15 мин. Среду в пробирках при необходимости скашивают.
А.4.3 Приготовление чашек Петри с питательным агаром
После стерилизации или расплавления среду помещают в водяную баню при температуре 44-47°С, затем разливают приблизительно по 15 в стерильные чашки Петри. Дают затвердеть. Используют среду без подсушивания.
Допускается использование ГРМ-агара (питательный агар для культивирования микроорганизмов на основе гидролизата рыбной муки), который готовят в соответствии с рекомендациями, указанными на этикетке.
А.5 Агар мясо-пептонный - по ГОСТ 10444.1
А.6 Бульон мясо-пептонный с глюкозой - по ГОСТ 10444.1
Для посевов используют среду, разлитую в пробирки по 6-7 .
А.7 Среды с углеводами (среды Гисса)
Среды готовят по ГОСТ 10444.1 или используют сухие среды с углеводами, среду из которых готовят в соответствии с рекомендациями, указанными на этикетке.