Перед употреблением культуры реактивируют.
Реактивация аэробных культур - по 4.1.1.2.3.
Культуру анаэробного тест-штамма C. oedematiens 198 реактивируют двукратным пересевом в пробирки с предварительно регенерированной средой Китт-Тароцци и инкубированием в течение 20-24 ч при 
.
. 4.1.2.2.3 Построение градуировочного графика
Готовят концентрированную суспензию бактериальной культуры с известным содержанием микробных клеток и делают из нее разведения изотоническим раствором хлористого натрия или питательной средой одним из следующих методов:
а) на плотную среду в пробирке или в чашке Петри высевают культуру тест-штамма, например E. coli, объемом от 0,1 до 0,2 
, культивируют 20-24 ч в термостате, после чего смывают культуру небольшим количеством изотонического раствора хлористого натрия. Мутность полученной концентрированной суспензии визуально сравнивают с мутностью оптического стандарта. Доводят мутность суспензии до мутности оптического стандарта добавлением изотонического раствора или бактериальной взвеси. Количество микробных клеток в полученной суспензии оценивают на основании технического документа (ТД) на оптический стандарт мутности. Обычно оно соответствует примерно 1 
.
, культивируют 20-24 ч в термостате, после чего смывают культуру небольшим количеством изотонического раствора хлористого натрия. Мутность полученной концентрированной суспензии визуально сравнивают с мутностью оптического стандарта. Доводят мутность суспензии до мутности оптического стандарта добавлением изотонического раствора или бактериальной взвеси. Количество микробных клеток в полученной суспензии оценивают на основании технического документа (ТД) на оптический стандарт мутности. Обычно оно соответствует примерно 1 . Из суспензии делают несколько разведений в соответствии с таблицей 1 (количество микробных клеток в разведенных суспензиях рассчитано для содержания количества микробных клеток в концентрированной суспензии, равного 1 
);
); Таблица 1 - Приготовление разведений
Объем концентрированной суспензии,  | Объем изотонического раствора,  | Количество микробных клеток в 1  суспензии |
4 | 1 | 800000 |
3 | 2 | 600000 |
2 | 3 | 400000 |
1 | 4 | 200000 |
б) в пробирке с жидкой питательной средой выращивают культуру тест-штамма (например E. coli) и определяют в ней количество микробных клеток бактериологическим методом по 4.1.1.
Далее из исходной культуры делают разведения, как это указано в таблице 1, используя вместо изотонического раствора питательную среду. Количество клеток в 1 
каждой разведенной суспензии рассчитывают с учетом показателя разведения (отношения взятого объема концентрированной суспензии к общему объему разведенной суспензии).
каждой разведенной суспензии рассчитывают с учетом показателя разведения (отношения взятого объема концентрированной суспензии к общему объему разведенной суспензии). Измеряют оптические плотности концентрированной и разведенных суспензий на фотоэлектроколориметре при длине волны 630-670 нм (красный светофильтр) или 520-560 нм (зеленый светофильтр) в кювете с рабочей длиной 5 мм. В качестве оптического контроля используют изотонический раствор или питательную среду.
Строят градуировочный график: по оси абсцисс откладывают количества микробных клеток в 1 
суспензий, по оси ординат - соответствующие им оптические плотности.
суспензий, по оси ординат - соответствующие им оптические плотности. 4.1.2.3 Проведение испытания
4.1.2.3.1 Испытание жидкой питательной среды
В две-три пробирки с испытуемой питательной средой вносят культуру тест-штамма, подготовленную по 4.1.2.2.2: по 0,2 
культуры аэробного тест-штамма по 0,5-1 
под слой вазелинового масла - анаэробного. Пробы инкубируют 20-24 ч при 
.
культуры аэробного тест-штамма по 0,5-1 под слой вазелинового масла - анаэробного. Пробы инкубируют 20-24 ч при . Пробирки с 20-24-часовыми культурами встряхивают, пробы заливают в кюветы фотоэлектроколориметра и измеряют оптические плотности суспензий относительно испытуемой среды в качестве оптического контроля при длине волны 630-670 или 520-560 нм.
4.1.2.3.2 Испытание плотной питательной среды
В две-три чашки Петри с испытуемой плотной средой вносят по 0,5 
20-24-часовой культуры тест-штамма по 4.1.2.2.2 и равномерно распределяют по поверхности. Чашки закрывают и выдерживают в термостате при 
в течение 24 ч. Затем делают смыв культуры с плотной питательной среды в чашке 10 
изотонического раствора хлористого натрия. Для снятия культуры можно использовать стеклянный шпатель или палочку с резиновым наконечником, которые затем тщательно обмывают раствором хлористого натрия из того же объема.
20-24-часовой культуры тест-штамма по 4.1.2.2.2 и равномерно распределяют по поверхности. Чашки закрывают и выдерживают в термостате при в течение 24 ч. Затем делают смыв культуры с плотной питательной среды в чашке 10 изотонического раствора хлористого натрия. Для снятия культуры можно использовать стеклянный шпатель или палочку с резиновым наконечником, которые затем тщательно обмывают раствором хлористого натрия из того же объема. Интенсивность роста микроорганизмов определяют в смыве (при слабом росте) или в десятикратном разведении смыва (при сильном росте), для приготовления которого 0,5 
смыва вносят в пробирку с 4,5 
раствора хлористого натрия и тщательно перемешивают. Оптическую плотность суспензий измеряют на фотоэлектроколориметре при длинах волн 630-670 нм относительно раствора хлористого натрия в качестве оптического контроля.
смыва вносят в пробирку с 4,5 раствора хлористого натрия и тщательно перемешивают. Оптическую плотность суспензий измеряют на фотоэлектроколориметре при длинах волн 630-670 нм относительно раствора хлористого натрия в качестве оптического контроля. 4.1.2.4 Обработка результатов
Интенсивность роста микроорганизмов выражают как среднее арифметическое результатов двух-трех определений оптических плотностей суспензий (культуры или смыва) или как соответствующее ему количество клеток в 1 
культуры, определенное по градуировочному графику.
культуры, определенное по градуировочному графику.4.2 Метод определения чувствительности питательной среды к разным видам микроорганизмов
Метод заключается в получении концентрированной микробной суспензии, содержащей определенное количество микробных клеток, приготовлении из нее серии разведенных суспензий, высеве в испытуемую среду точных объемов разведенных суспензий и определении максимального разведения или минимального количества клеток, обеспечивающего рост микробной культуры.
4.2.1 Аппаратура, материалы и реактивы
Аппаратура, материалы и реактивы по 4.1.1.1.
Тест-штамм аэробных микроорганизмов Streptococcus haemolyticus Dick 1 или другие виды микроорганизмов, показательные для испытуемой среды.
4.2.2 Подготовка к испытанию
4.2.2.1 Подготовка испытуемой среды и бактериальной культуры
Испытуемую среду готовят по 4.1.2.2.1, бактериальную культуру - по 4.1.2.2.2.
4.2.2.2 Приготовление суспензии тест-штамма
Готовят исходную суспензию бактериальной культуры, содержащую 
клеток в 1 
, сравнивая ее мутность с мутностью оптического стандарта (4.1.2.2.3).
клеток в 1 , сравнивая ее мутность с мутностью оптического стандарта (4.1.2.2.3). Из полученной суспензии методом последовательных десятикратных разведений по 4.1.1.3 получают пять-семь разведенных суспензий, в которых количество клеток уменьшается пропорционально показателю разведения. Расчетное количество клеток в разных объемах разведенных суспензий приведено в таблице 2.
Таблица 2 - Расчетное количество клеток
Показатель разведения | Количество клеток в объеме разведенной суспензии | |
0,1  | 0,2  | |
 | 10000 | 20000 |
 | 1000 | 2000 |
 | 100 | 200 |
 | 10 | 20 |
4.2.3 Проведение испытания
В пробирки с испытуемой средой пипеткой вносят по 0,1 или 0,2 
из трех-четырех разведенных суспензий бактериальной культуры, начиная с последней. Пробы инкубируют в термостате при 
в течение 24 ч. Затем в них для разных разведений визуально определяют наличие роста микроорганизмов (в жидких средах - в виде их помутнения, образования осадка, пленки, газа или других проявлений; на плотных средах - по формированию колоний).
из трех-четырех разведенных суспензий бактериальной культуры, начиная с последней. Пробы инкубируют в термостате при в течение 24 ч. Затем в них для разных разведений визуально определяют наличие роста микроорганизмов (в жидких средах - в виде их помутнения, образования осадка, пленки, газа или других проявлений; на плотных средах - по формированию колоний). 4.2.4 Обработка результатов
За чувствительность питательной среды принимают показатель максимального разведения культуры, дающего рост микроорганизма в испытуемой среде, или соответствующее ему количество микробных клеток, которое определяют по таблице 2 для внесенного объема бактериальной культуры.
4.3 Метод определения эффективности плотной питательной среды для роста микроорганизмов
Метод заключается в получении концентрированной микробной суспензии, содержащей определенное количество микробных клеток, приготовлении из нее разведенных суспензий, высеве на испытуемую плотную среду точных объемов разведенных суспензий, подсчете количеств выросших колоний и сравнении их с количествами высеянных клеток.
4.3.1 Аппаратура, материалы и реактивы
Аппаратура, материалы и реактивы - по 4.2.1.
4.3.2 Подготовка к испытанию
Подготовка культуры исходной суспензии тест-штамма и ее разведений с расчетным количеством клеток - по 4.2.2.
4.3.3 Проведение испытания
В 10 чашек Петри с испытуемой питательной средой пипетками вносят по 0,1 или 0,2 
двух разведенных суспензий с расчетным количеством клеток 100 (или 200) и 10 (или 20), начиная с последней, по 5 чашек на каждое разведение. Суспензии равномерно распределяют по всей чашке, дают жидкости впитаться, после чего чашки переворачивают вверх дном и ставят в термостат температурой 
на 20-24ч.
двух разведенных суспензий с расчетным количеством клеток 100 (или 200) и 10 (или 20), начиная с последней, по 5 чашек на каждое разведение. Суспензии равномерно распределяют по всей чашке, дают жидкости впитаться, после чего чашки переворачивают вверх дном и ставят в термостат температурой на 20-24ч. Подсчитывают количество колоний, выросших на чашках Петри с испытуемой средой из внесенного объема каждой разведенной суспензии.
4.3.4 Обработка результатов
Определяют среднее арифметическое подсчитанного количества колоний в каждом разведении (для пяти чашек), сравнивают его с расчетным количеством (таблица 2) и выражают в процентах.