За результат испытаний эффективности среды принимают среднее арифметическое результатов вычислений для обоих разведений, выраженное в процентах.
4.4 Методы определения влияния питательной среды на типичность микроорганизмов
Влияние питательной среды на типичность тест-штаммов микроорганизмов определяют сравнением со свойствами, приведенными в таблице 3.
Таблица 3 - Морфологические и культурально-биохимические свойства тест-штаммов
Свойство тест-штамма | Характеристика тест-штамма микроорганизмов | ||||
E. coli | S. flexneri | S. aureus | E. faecalis | C. xerosis | |
| Форма и размер клеток | Палочки длиной 0,3-0,4 мкм | Палочки длиной 0,3-0,4 мкм | Кокки диаметром 0,5-1 мкм | Овоидные, слегка вытянутые кокки диаметром 0,5-1 мкм | Короткие палочки, иногда булавовидной формы размерами (0,3-0,8x1,5-8,0) мкм |
| Расположение клеток в мазке | Одиночные клетки | Одиночные клетки | Одиночные, иногда парами | Парами, иногда короткими цепями | Одиночные или парами |
| Окраска по Граму | - | - | + | + | + |
| Форма роста культуры в жидкой среде (МПБ) | Сильное равномерное помутнение, легко разбивающийся осадок | Слабое равномерное помутнение, легко разбивающийся осадок | Равномерное помутнение и образование осадка | Слабое равномерное помутнение, осадок в виде косички | Слабое помутнение, придонный рост с образованием осадка |
| Форма колоний на плотной среде (МПА) | Блестящие или полупрозрачные колонии S-формы | Блестящие или полупрозрачные колонии S-формы | Выпуклые округлые колонии, диаметром 1-4 мм, желтого цвета, S-, реже - R-формы | Мелкие колонии, диаметром 0,5-1 мм, мутные серовато-белые; в газоне - кожистая пленка | Мелкие колонии, диаметром не более 1-3 мм, S- или R-формы |
| Сбраживание сахаров: | |||||
| глюкоза | +, газ | + | + | + |  |
| галактоза | + | + | + | + |  |
| лактоза | +, газ | | + | + | - |
| мальтоза | +, газ | + | + | + | - |
| сахароза | - | | + | + | + |
| раффиноза | + | | - | - | - |
| ксилоза | +, газ | - | - | - | - |
| арабиноза | +, газ | + | - | - | - |
| сорбит | +, газ | |  | + | - |
| маннит | +, газ | + | | + | - |
| Примечание - Знаком "+" обозначают микроорганизмы, красящиеся по Граму или сбраживающие сахара; знаком "-" - не красящиеся по Граму или не сбраживающие сахара; знаком " " - реакция вариабильна, в качестве теста не рекомендуется. | |||||
4.4.1 Метод определения влияния питательной среды на морфологию клеток тест-штаммов микроорганизмов и характер их окраски по Граму
Сущность метода заключается в посеве реактивированной микробной культуры тест-штамма в испытуемую жидкую или на плотную питательную среду, инкубировании посевов, трех-, пятикратных пересевах культуры на свежие порции той же питательной среды, приготовлении мазков из получаемых в каждом пассаже культур, окраске мазков по Граму, просмотре окрашенных мазков в оптическом микроскопе и оценке характера окраски по Граму и морфологии клеток в соответствии с таблицей 3.
4.4.1.1 Аппаратура, материалы и реактивы
Аппаратура, материалы и реактивы по 4.1.1.1.
Микроскоп световой биологический по ГОСТ 8074, обеспечивающий увеличение 
.
. Стекла предметные для микропрепаратов по ГОСТ 9284.
Масло иммерсионное для микроскопии по ГОСТ 13739.
Горелка газовая или спиртовка.
Вода питьевая по ГОСТ Р 51232 и [1].
Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.
Йод кристаллический по ГОСТ 4159, раствор концентрации 50 
в этиловом спирте
в этиловом спирте Калий йодистый по ГОСТ 4232.
Кристаллический фиолетовый.
Натрия гидроокись по ГОСТ 4328, раствор концентрации 5 
.
. Спирт этиловый ректификованный по ГОСТ 18300.
Фуксин кислый.
Фуксин основной, раствор концентрации 50 
в этиловом спирте.
в этиловом спирте. 4.4.1.2 Подготовка к испытанию
4.4.1.2.1 Приготовление реактивов для окраски по Граму (модификация Г.П. Калины)
Приготовление реактива 1
В 100 
этилового спирта растворяют 0,5 г кристаллического фиолетового.
этилового спирта растворяют 0,5 г кристаллического фиолетового. Приготовление реактива 2
5 г йодистого калия растворяют в 1 
спирта в водяной бане при температуре 
при постоянном перемешивании.
спирта в водяной бане при температуре при постоянном перемешивании. К 96 
спиртового раствора йодистого калия добавляют 2 
спиртового раствора основного фуксина и 2 
спиртового раствора йода.
спиртового раствора йодистого калия добавляют 2 спиртового раствора основного фуксина и 2 спиртового раствора йода. 4.4.1.2.2 Подготовка питательных сред и культур тест-штаммов
Подготовка питательных сред и культур тест-штаммов - по 4.1.1.2.
4.4.1.3 Проведение испытания
В пробирки или чашки Петри с испытуемой и контрольной (МПБ или МПА) питательными средами вносят по 0,2 
20-24-часовых культур тест-штаммов и инкубируют от 20 до 24 ч при температуре 
. Из полученных культур на испытуемой и контрольной средах отбирают пробы для пересева на свежие порции питательных сред (второй пассаж). Аналогично делают еще один-три пересева 20-24-часовых культур на свежие порции питательных сред (всего три-пять пассажей).
20-24-часовых культур тест-штаммов и инкубируют от 20 до 24 ч при температуре . Из полученных культур на испытуемой и контрольной средах отбирают пробы для пересева на свежие порции питательных сред (второй пассаж). Аналогично делают еще один-три пересева 20-24-часовых культур на свежие порции питательных сред (всего три-пять пассажей). Из каждого пассажа на два чистых предметных стекла бактериальной петлей наносят по капле дистиллированной воды, вносят в нее петлей небольшое количество микробной культуры тест-штамма в испытуемой и контрольной среде и каплю реактива 1. Смесь распределяют петлей на участке площадью примерно 1 
.
. Приготовленный мазок препарата подсушивают на воздухе, после чего фиксируют: быстро проводят два-три раза над верхней частью пламени горелки.
Препарат промывают питьевой водой и тщательно просушивают фильтровальной бумагой.
После просушивания на препарат наливают реактив 2 так, чтобы жидкость покрыла всю поверхность стекла, и выдерживают 0,5-1 мин. Раствор сливают. Предметное стекло ополаскивают проточной водой. Препарат просушивают фильтровальной бумагой.
Мазки просматривают под микроскопом с иммерсионной системой.
В результате окрашивания микроорганизмы, красящиеся по Граму (грамположительные), приобретают темно-фиолетовый цвет; не красящиеся по Граму (грамотрицательные) - ярко-малиновый или красный цвет.
При микроскопии мазков одновременно оценивают морфологию клеток:
- размеры;
- форму: прямая (палочки), круглая и овоидная (кокки), изогнутая, спиральная, ветвящаяся, лентовидная, веретеновидная и т.д.;
- наличие спор, жгутиков;
- расположение в мазке (одиночное, парами, короткими или длинными цепочками, тетрадами, скоплениями, нитями и т.д.
4.4.1.4 Оценка результатов
Морфология клеток тест-штаммов и отношение к окраске по Граму должны соответствовать характеристике по таблице 3, что свидетельствует об отсутствии влияния питательной среды на типичность микроорганизмов. При несоответствии морфологии клеток и окраски по Граму требованиям таблицы 3 в двух пассажах из пяти (или в одном из трех) испытание дважды повторяют с новыми пробами испытуемой питательной среды и при повторении несоответствия среду бракуют.
При несоответствии морфологии клеток тест-штамма и характера окраски по Граму в контрольной среде опыт дважды повторяют с новыми пробами контрольной питательной среды. При несоответствии тех же свойств тест-штамма свойствам таблицы 3 в двух повторных определениях меняют исходную культуру тест-штамма как несоответствующую своему виду и типу.
4.4.2 Метод определения влияния питательной среды на формы роста тест-штаммов в питательных средах
Сущность метода заключается в посеве реактивированной микробной культуры тест-штамма в испытуемую жидкую или на плотную питательную среду, инкубировании посевов, трех-, пятикратных пересевах культуры на свежие порции той же питательной среды, визуальном просмотре выросших культур в жидких питательных средах, визуальном или при малом увеличении просмотре колоний - на плотных питательных средах и оценке форм их роста в соответствии с таблицей 3.
4.4.2.1 Аппаратура, материалы и реактивы