5) правильность метода должна оцениваться на всем диапазоне измеряемых концентраций; поэтому должны быть исследованы образцы с низкими, нормальными и повышенными концентрациями вещества;
6) сравнение методов проводится на контрольном материале и на биологическом материале, полученном от больных и здоровых лиц;
7) очень важным является выбор метода для сравнения.
Статистическая обработка результатов состоит в оценке степени совпадения результатов, полученных методом-кандидатом и сравнительным методом.
в отличие от воспроизводимости, оценка правильности результатов - значительно более сложная задача.
Для статистической обработки результатов могут применяться различные статистические тесты.
Ниже приводится статистический способ оценки результатов сравниваемых методов, не требующих специальной вычислительной техники и позволяющий судить о правильности метода-кандидата.
Статистическая оценка правильности результатов сравниваемых методов
Для оценки правильности определяются: достоверность различий результатов и наличие статистической связи.
Определение достоверности различий результатов
Определить достоверность различий результатов можно с помощью теста Стьюдента (формула 8).
Наиболее достоверные результаты тест Стьюдента дает при нормальном распределении результатов.
Поэтому в тех случаях, когда распределение результатов не является нормальным, или вид распределения невозможно определить из-за малого числа наблюдений, рекомендуется использовать непараметрические критерии - критерий знаков, тест Вилкоксона.
Преимуществом непараметрических критериев является их независимость от вида распределения результатов и простота расчета.
Критерий знаков эффективен при большом числе определений. Он учитывает не степень различий в каждой паре, а лишь их направленность (знак) и основан на подсчете числа разностей между результатами X и Y со знаком + или -.
Если число наблюдений невелико, и критерий знаков не выявил различий, целесообразно применить критерий Т - парный критерий Вилкоксона. Критерий Т более чувствителен, он основан на следующем приеме: вычислен разностям между двумя рядами результатов (X и Y) дают ранговые номера в порядке возрастания абсолютных значений разности (без учета ее знака). Совпадающим значениям дают ранговые номера, равные средним из их порядковых значений. Например, одинаковые разности, стоящие на 3-м и 4-м местах, получают ранг 3,5. Далее вычисляется величина Т, равная сумме ранговых номеров разностей, имеющих отрицательное значение (т.е. разностей, противоположных наблюдаемым в большинстве).
Таблица 9
Пример расчета критерия Т-Вилкоксона
┌──────┬────────────┬──────────────┬────────────────┬───────────────────┐
│ NN │Результаты │Результаты │ Разность │Ранговый номер │
│ п/п │ ряда Х │ ряда Y │ │ разности │
├──────┼────────────┼──────────────┼────────────────┼───────────────────┤
│ 1 │ 107 │ 88 │ 19 │ 6,5 │
│ 2 │ 93 │ 74 │ 19 │ 6,5 │
│ 3 │ 121 │ 92 │ 29 │ 8 │
│ 4 │ 85 │ 72 │ 13 │ 4 │
│ 5 │ 89 │ 90 │ -1 │ 1 │
│ 6 │ 110 │ 108 │ 2 │ 2 │
│ 7 │ 81 │ 67 │ 14 │ 5 │
│ 8 │ 102 │ 110 │ -8 │ 3 │
└──────┴────────────┴──────────────┴────────────────┴───────────────────┘
┌──────┬────────────┬──────────────┬────────────────┬───────────────────┐
Т = 1 + 3 = 4
Заключения строятся на достигнутом уровне значимости.
Для целей лабораторной диагностики достаточным является уровень значимости Р = 0,05. Полученные значения сравнивают с табличными. Если Р < 0,05, то различия между методом-кандидатом и сравнительным методом достоверны, т.е. метод-кандидат - неправильный. Если Р > 0,05, то различия на достигнутом уровне значимости не достоверны, т.е. метод-кандидат может быть правильным. Дальнейшая обработка результатов состоит в оценке статистической связи.
Оценка статистической связи
Для оценки статистической связи можно использовать корреляционный метод и метод регрессии. Корреляционный метод менее информативен, чем метод регрессии.
Корреляционный метод. Корреляция указывает на степень связи двух рядов чисел, т.е. изучается зависимость между результатами X и Y двух методов. Для определения корреляции рассчитывают обычный коэффициент корреляции r и коэффициент ранговой корреляции g, при расчете которого результаты оцениваются порядковыми номерами - рангами от меньших результатов к большим. Порядковый номер каждого результата является его рангом.
Формулы расчета коэффициента корреляции 9 и 10
Коэффициенты корреляции могут колебаться от 0 до +1 при положительной корреляции и от 0 до -1 - при отрицательной корреляции.
Если имеется хорошее совпадение результатов сравниваемых методов, то значение r будет около 1,0 (0,9 - 0,99). Чем ниже величина коэффициента корреляции, тем меньше степень совпадения результатов сравниваемых методов. При отсутствии связи между результатами r = 0. При отрицательной корреляции, при изменении результатов группы "Х", результаты группы "Y" будут изменяться в противоположном направлении: r = -1.
Метод регрессии. Если корреляция указывает на степень связи, то регрессия позволяет определить, как количественно меняется один результат по мере изменения другого.
Для построения эмпирической линии регрессии на диаграмму наносят парные результаты в виде точек: на оси абсцисс - сравнительного метода, а на оси ординат - метода-кандидата. Диаграмма дает первое впечатление о типе связи между двумя методами. При линейности регрессии точки располагаются вокруг прямой линии.
Если регрессия нелинейна, то требуется дальнейшая доработка метода-кандидата, т.е. он не пригоден для целей лабораторной диагностики.
Линейная регрессия рассчитывается по формуле 11.
Если "а" статистически отличается от 0, то метод-кандидат имеет систематическую погрешность по отношению к сравнительному методу. Эта ошибка может быть приемлемой и неприемлемой.
В таблице 10 приведена статистическая обработка результатов сравнения рефрактометрического и биуретового методов определения белка.
Таблица 10
Статистическая оценка результатов биуретового (унифицированного) и рефрактометрического методов определения белка в сыворотке крови
┌─────────┬──┬────────┬───────────┬───────┬──────────┬───────────┬──────┐
│ Методы │n │_ │ t-тест │Крите- │Коэффици- │Линейный │Рег- │
│ │ │Х, S │ │рий │ент корре-│коэффициент│рес- │
│ │ │(г/л) │ │знаков │ляции ран-│корреляции │сия │
│ │ │ │ │ │гов │ │ │
├─────────┼──┼────────┼───────────┼───────┼──────────┼───────────┼──────┤
│Биурето- │ │_ │ │ │ │ │ │
│вый (Х) │50│Х = 76 │ t = 6,26 │+48 │ 0,75 │ 0,75 │Х=16+ │
│ │ │S = 7,2 │ │ -2 │ │ │0,96Y │
│ │ │ │ │ │ │ │ │
│Рефракто-│ │_ │ │ │ │ │ │
│метриче- │ │Y = 86 │ p < 0,05 │p<0,05 │ │ │Sx=8,9│
│ский (Y) │50│S = 8,7 │ │ │ │ │ │
└─────────┴──┴────────┴───────────┴───────┴──────────┴───────────┴──────┘
┌─────────┬──┬────────┬───────────┬───────┬──────────┬───────────┬──────┐
Различия результатов - достоверны, связь низкая.
В таблице 11 сравниваются результаты диацетилмонооксимного и уреазного методов определения мочевины в сыворотке крови. Сравнительным методом в данном случае является наиболее специфичный уреазный метод.
Таблица 11
Статистическая оценка результатов сравнения уреазного и диацетилмонооксимного методов
┌─────────┬──┬────────┬───────────┬───────┬─────────────────┬───────────┐
│Метод │n │_ │ t-тест │Крите- │ Тест Вилкоксона │Коэффици- │
│ │ │Х, S │ │рий │ │ент корре- │
│ │ │(ммоль/ │ │знаков │ │ляции │
│ │ │ л) │ │ │ │ │
├─────────┼──┼────────┼───────────┼───────┼─────────────────┼───────────┤
│ 1 │2 │ 3 │ 4 │ 5 │ 6 │ 7 │
├─────────┼──┼────────┼───────────┼───────┼─────────────────┼───────────┤
│ На нормальных величинах │ │
│ │ │_ │ │ │ │ │
│Уреазный │14│Х = 5,26│ t = 0,26 │+8 │ Т = 45 │ 0,94 │
│(Х) │ │S = 2,3 │ │ -6 │ │ │
│ │ │ │ │ │ │ │
│Диацетил-│ │_ │ │ │ │ │
│моноокси-│ │Y = 5,0 │ p > 0,05 │p>0,05 │ p > 0,05 │ │
│мный (Y) │14│S = 2,0 │ │ │ │ │
│ │ │ │ │ │ │ │
│ На патологических величинах │
│ │ │_ │ │ │ │ │
│Уреазный │14│Х = 18,6│ t = 0,194│+8 │ Т = 46 │ 0,98 │
│(Х) │ │S = 7,76│ │ -6 │ │ │
│ │ │ │ │ │ │ │
│Диацетил-│ │_ │ │ │ │ │
│моноокси-│ │Y = 19,2│ p > 0,05 │p>0,05 │ p > 0,05 │ │
│мный (Y) │14│S = 8,0 │ │ │ │ │
└─────────┴──┴────────┴───────────┴───────┴─────────────────┴───────────┘
┌─────────┬──┬────────┬───────────┬───────┬─────────────────┬───────────┐
Различия результатов не достоверны, связь высокая.
III. Специфичность
Аналитическая специфичность метода - способность метода измерять лишь тот компонент или те компоненты, для определения которых он предназначен. Низкая специфичность приводит к получению неправильных результатов и должна быть указана в описании метода. Оценка специфичности не имеет завершения, поскольку любое вещество может повлиять на результаты. Например к методам с низкой специфичностью относится редуктометрический метод для определения группы редуцирующих веществ в крови или реакция Яффе для определения креатинина и креатининподобных хромогенов крови.
Высокоспецифичными являются ферментативные методы определения глюкозы, мочевины.