3.3.2. Реактивы.
1. Глюкоза (для инъекций в/в).
2. Ацетон, ч, чда.
3. Слитая человеческая сыворотка.
4. Цельная кровь. К 0,1 мл цельной крови добавляют 0,1 мл дистиллированной воды для лизиса эритроцитов.
5. Соляная кислота 0,1 моль/л.
6. Натрий хлористый, ч, чда, хч, 152 ммоль/л.
3.3.3. Методы исследования.
Используются диагностические полоски и качественные пробы.
3.3.4. Способ приготовления.
В мерную колбу на 500 мл с 200 мл дистиллированной воды добавляют 5 мл глюкозы, 2 мл ацетона, 25 мл слитой человеческой сыворотки и 0,1 мл лизированной крови. Тщательно перемешивают и доводят объем до метки физиологическим раствором. Используя 0,1 моль/л HCl, величину рН доводят до желаемой величины (6,0).
3.3.5. Условия хранения, срок годности.
Контрольный раствор хранят в холодильнике.
Срок годности - более одного месяца.
4. Приготовление сливной мочи для токсикологических исследований.
4.1. Назначение.
Применяется в качестве контрольного материала для контроля качества токсикологических исследований в моче.
4.2. Реактивы.
1. Сливная моча. Отбирают пробы мочи пациентов (не курящих и не принимающих лекарств) и собирают слив, объемом до 10 л. Для исключения посторонних примесей сливную мочу фильтруют через стеклянную вату. Хранят при 4 град.С - 7 град.С.
2. Морфин гидрохлорид, фарм.
3. Кодеин сульфат, фарм.
4. Хинин гидрохлорид, фарм.
5. Метадон гидрохлорид, фарм.
6. Фенобарбитал натрия, фарм.
7. Глютетимид, фарм.
8. Амфетамин, фарм.
9. Абсолютный спирт.
4.3. Методы исследования.
Используются обычно применяемые в лаборатории методы исследования токсикологических веществ в моче.
4.4. Способы приготовления.
Часть собранной сливной мочи исследуют на содержание наиболее часто употребляемых лекарств. Сливную мочу используют только в случае отрицательной реакции. Затем к моче добавляют по 20,0 мг морфина гидрохлорида, кодеина сульфата, хинина гидрохлорида, метадона гидрохлорида, фенобарбитала натрия и глютетимида, а также 30,0 мг амфетамина. Перед добавлением в слив глютетимид нужно растворить в 3 мл абсолютного спирта. Хорошо перемешать и разлить по 10 - 15 мл в пузырьки.
4.5. Условия хранения, срок годности.
Сливную мочу хранят при -20 град.С.
Срок годности - около 8 месяцев.
Для использования в качестве контрольного материала сливную мочу оттаивают и исследуют вместе с пробами больных.
III. Некоторые источники ошибок при исследовании мочи
1. При определении относительной плотности урометром:
1.1. Сосуд, содержащий мочу, должен быть достаточного размера, чтобы урометр свободно плавал в нем. В противном случае результат будет неправильным.
1.2. Пока идет считывание результатов, урометр не должен прикасаться к стенкам или дну сосуда. Если мочи недостаточно для свободного перемещения урометра, ее разводят дистиллированной водой в 2 - 3 раза, определяют относительную плотность и умножают на степень разведения.
1.3. При определении относительной плотности большое значение имеет температура окружающей среды и исследуемой пробы, так как урометры приспособлены для измерения при определенной температуре (15 град.С, 20 град.С, 22,5 град.С), обозначенной на приборе. Любое отклонение температуры окружающей среды от обозначенной приводит к изменению объема мочи, а также ее концентрации и относительной плотности.
Это обстоятельство нужно иметь в виду и в случае надобности вносить соответствующую коррекцию на температуру.
Точность этого метода для клинических целей достаточна, если только пользоваться проверенными урометрами.
2. При определении относительной плотности на рефрактометре:
2.1. Так как показатель преломления измеряется оптически, то призма и камера должны быть совершенно чистыми и без царапин. После каждого использования обе части промывают дистиллированной водой и протирают досуха мягкой неворсистой тканью. Нельзя использовать газ для сушки. Для предохранения от пыли прибор нужно держать под чехлом.
2.2. Измерить показатель преломления 5 +- 0,01% раствором хлористого натрия. Показатель должен быть равен 1,3415 +- 0,0005 или по шкале относительной плотности - 1,022 +- 0,001.
3. При обнаружении белка методами, основанными на осаждении белков, необходимо соблюдать правила, нарушение которых приводит к значительным ошибкам при исследовании.
3.1. Исследуемая моча должна иметь кислую реакцию. При щелочной реакции мочу слегка подкисляют уксусной кислотой. Исследование пробы со щелочной мочой в тех случаях, когда в качестве реактива используется кислота, может привести к нейтрализации кислоты и к отрицательному результату при положительной реакции.
3.2. Исследуемая моча должна быть прозрачной. Мутность необходимо предварительно удалить каким-нибудь способом, не вызывая осаждения белка. При исследовании пробы с мутной мочой нет возможности ясно разграничить ранее имевшуюся мутность от получившейся при осаждении белков.
4. При исследовании скрытой крови.
Подобный гемоглобину эффект дают хлорофилл, миоглобин, препараты железа и другие случайные примеси, в особенности соли тяжелых металлов (хрома, меди и т.д.). Поэтому необходимо при работе употреблять абсолютно чистую посуду и реактивы. Ложноположительная проба получается после приема солей иодистого и бромистого калия. Наличие этих солей в моче можно узнать по синей окраске, появляющейся при смешивании мочи с уксусной кислотой, перекисью водорода и с раствором крахмала. В моче, содержащей много лейкоцитов, можно получить ложноположительную реакцию, поэтому такую пробу исследуют после предварительного нагревания мочи для инактивации ферментов гнойных клеток. Моча, которую исследуют на кровь, должна быть свежей. При стоянии гемоглобин превращается в метгемоглобин, который не имеет псевдопероксидазного действия и дает отрицательные пробы.