5. Влияние консервантов на результаты исследования мочи.
Перед использованием какого-либо консерванта следует иметь в виду следующие их особенности:
Хлороформ осаждается на дно пробирки и мешает исследованию осадка, кроме того он может восстанавливать медь и, тем самым, искажать результат определения сахара.
Тимол в количестве 0,1 г на 100 мл мочи не обладает такими отрицательными качествами и, вместе с тем, сохраняет мочу на несколько дней, но прибавленный в большом количестве, он может помешать кольцевой реакции на белок и реакции на индикан.
Прибавление борной кислоты отражается на определении сахара. Формальдегид в количестве 2 - 3 капель очень удобен как консервант для изучения осадка, но в большем количестве сам дает осадок, и, кроме того, мешает определению белка, сахара и индикана.
Карболовая кислота затрудняет определение ацетона.
Толуол - самое удобное средство для предохранения мочи - прибавляют в таком количестве, чтобы на всей поверхности мочи плавал тонкий его слой.
| Начальник Главного управления лечебно-профилактической помощи | А.М. Москвичев |
Приложение 4
к приказу Минздрава СССР
от 23 апреля 1985 г. N 545
Методические указания по оценке аналитической надежности клинических лабораторных методов исследования (для республиканских, краевых и областных организационно-методических и контрольных центров по лабораторному делу)
Критерии оценки аналитической надежности метода
Одним из важнейших направлений развития клинической лабораторной диагностики как научной дисциплины является расширение методических возможностей путем совершенствования аналитических методов, препаративных и измерительных приборов.
Качество результата лабораторного исследования зависит от многих факторов, среди которых важное значение имеет качество метода.
Для объективной оценки аналитических качеств метода рекомендуется оценка его аналитической надежности.
В отличие от системы контроля качества работы лабораторий, которая должна давать ежедневную информацию о качестве получаемых в лаборатории результатов, оценка аналитической надежности метода - продолжительный процесс, во время которого постепенно накапливается информация об аналитических качествах метода.
При оценке надежности метода задача состоит в выявлении погрешностей, зависящих от метода; поэтому важно оценку надежности метода проводить не в одной, а в нескольких точно работающих (референтных) лабораториях с соблюдением всех указаний по применению метода.
Количественные аналитические методы клинических лабораторных исследований разнообразны, поэтому описываемые способы оценки надежности метода могут быть пригодны не для всех методов. Оценке аналитической надежности должны подвергаться методы, которые рекомендуются для официального утверждения, новые методы и методы, существенно модифицированные.
Критерии оценки аналитической надежности метода
Основными критериями, по которым оценивается метод, являются следующие: воспроизводимость, правильность, специфичность, чувствительность.
I. Воспроизводимость
Воспроизводимость результатов - соответствие результатов повторных определений в одном и том же материале. Воспроизводимость не имеет числовой величины, она определяется степенью разброса результатов.
Воспроизводимость аналитического метода - определяется воспроизводимостью результатов, полученных этим методом, с учетом воспроизводимости в серии, во времени и межлабораторной воспроизводимости.
Понятие, обратное воспроизводимости, - разброс результатов, или аналитическая вариация, - зависит от наличия случайных погрешностей и может быть охарактеризовано количественно. Воспроизводимость рассчитывается либо по двум параллельным результатам при исследовании различных образцов, либо по результатам повторных определений на одном и том же контрольном материале. Контрольный материал должен быть стабильным в течение всего периода проверки.
Статистическим показателем разброса результатов является среднеквадратическое отклонение S и относительный показатель разброса результатов - коэффициент вариации V. Сравнивают аналитическую вариацию метода с помощью F-теста. (Формулы 1 - 7).
Воспроизводимость метода может зависеть от концентрации исследуемого компонента; поэтому S определяется на разных уровнях концентрации - нормальном и патологическом. Это позволяет более полно охарактеризовать воспроизводимость метода на всем диапазоне определяемых концентраций.
Чем меньше коэффициент вариации, тем выше воспроизводимость результатов, получаемых тем или иным методом.
Такой способ оценки воспроизводимости позволяет объективно оценивать и сравнивать воспроизводимость различных методов. Воспроизводимость метода обычно зависит от случайных погрешностей, обусловленных количеством процедур метода - осаждение, центрифугирование, пипетирование, а также стабильностью окрашенного комплекса и другими причинами. Для более правильной оценки воспроизводимости метода количество параллельных исследований не должно быть меньше 20. С увеличением количества исследований (n) точность расчета среднеквадратического отклонения возрастает. При этом погрешности, связанные с работой, должны быть сведены к минимуму и, по возможности, условия работы не должны меняться в течение всего периода исследования.
II. Правильность
Правильность результатов - соответствие среднего значения результатов повторных определений одного и того же материала с должной величиной. Правильность не имеет числовой величины, она определяется неправильностью.
Правильность метода определяется правильностью результатов, полученных этим методом.
Правильность зависит от наличия систематических погрешностей метода.
Систематическая погрешность метода может быть обусловлена рядом причин: неспецифичностью метода, и тогда она определяется как постоянная систематическая погрешность; или неправильным способом построения калибровочной кривой, использованием калибровочного материала недостаточной степени чистоты, неправильной постановкой холостой пробы, и тогда она определяется как пропорциональная систематическая погрешность метода.
Постоянная и пропорциональная погрешности составляют общую систематическую погрешность метода.
Статистическим критерием правильности является средняя _ арифметическая (Х) и степень ее отклонения от истинного (номинального) значения m. Способами определения правильности могут быть:
способ добавки - внесение в биологическую жидкость точно взвешенного количества анализируемого вещества и определение его с помощью исследуемого метода;
способ смешивания проб - биологическая жидкость с низкой и с высокой концентрацией исследуемого вещества смешивается в различных соотношениях.
Способ добавки и смешивания проб (последний может быть применим в методах определения активности ферментов, где невозможно использовать способ добавки) позволяют определить только пропорциональную систематическую погрешность метода. Например, добавленное количество креатинина, определенное по реакции Яффе, может дать хороший процент выявления, однако методы, основанные на реакции Яффе, дают неправильные результаты за счет низкой специфичности метода. Процент выявления вещества, равный 90 - 110%, считается удовлетворительным для клинических лабораторных методов исследования.
Исследование контрольного материала с известным содержанием компонентов - наиболее простой способ оценки правильности. Однако, он может быть использован только для быстрой ориентировочной оценки правильности метода. Обязательным условием, ограничивающим возможности этого способа является использование метода, который указан в аннотации к контрольному материалу. Процедура изготовления контрольного материала, хранение его, вид используемой сыворотки могут в значительной степени изменить истинное содержание компонента. Особенно большим изменениям могут подвергнуться ферменты.
Сравнение методов. Наиболее информативным способом является способ сравнения методов. Данный способ позволяет определять общую систематическую погрешность метода. Смысл сравнения методов состоит в сравнении результатов, которые получены методом-кандидатом (т.е. методом, правильность которого исследуется) и сравнительным методом, который должен давать правильные результаты. Поэтому крайне важным является правильность сравнительного метода.
Международной федерацией клинической химии и Рабочей группой экспертов стран-членов СЭВ (Компендиум методорум по лабораторной диагностике) введено понятие - референтный метод.
Референтный метод - это метод, обладающий максимальной специфичностью, правильностью и воспроизводимостью результатов измерения. Он служит главным образом для сравнения методов при оценке аналитической надежности унифицированных и других методов.
Однако, референтные методы могут быть недоступны лабораториям, и для ряда компонентов они еще не разработаны. Поэтому в качестве сравнительных могут использоваться методы, правильность, которых исследована, и которые не дают существенного отклонения от истинных величин.
Для более точной оценки правильности предлагаемого метода сравнение методов следует проводить в соответствии с правилами сравнения методов.
Правила сравнения методов предусматривают:
1) точное соблюдение всех письменных указаний по применению метода;
2) проведение исследований под контролем качества с применением единого контрольного материала для гарантии стабильности условий исследования за время всего периода сравнения методов;
3) в сравниваемых методах должны быть проверены точность и линейность калибровочных кривых;
4) за время всего периода сравнения методов должны, по возможности, применяться одни и те же реактивы, приборы; работа проводится одними и теми же лаборантами;