Предотвращение появления ложно положительных сигналов (ЛПС)
1. Этапы приема, регистрации проб и выделения ДНК, приготовление реакционных смесей и амплификации, детекции продуктов амплификации должны размещаться в разных помещениях. Выделение ДНК и приготовление реакционных смесей следует проводить в ПЦР-боксах.
2. Приготовление реакционных смесей для проведения ПЦР (без ДНК-матриц), т.н. "master-mix" следует готовить в отдельном помещении. Подготовка ПЦР-смесей при массовом анализе проводится либо в начале рабочего дня тем персоналом, который в дальнейшем будет проводить обработку образцов и выделение ДНК, либо отдельными людьми, в чью задачу входит только приготовление "master-mix" (второе предпочтительнее). В любом случае помещение для подготовки "master-mix" должно быть оборудовано отдельными наборами пипеток, необходимой посудой, стерильными перчатками, лабораторной одеждой и обувью, а также морозильниками для хранения основных запасов олигонуклеотидов, термополимеразы, буферов и трифосфатов, предварительно разлитыми на отдельные аликвоты объемом не более недельной потребности.
3. Планирование проведения анализа должно предусматривать минимизацию ручной обработки реакционных смесей.
4. Вскрытие пробирок с продуктами ПЦР разрешается только в пост-ПЦР помещении. Запрещается выход персонала из пост-ПЦР помещений в лабораторной одежде и перенос отработанных материалов (одноразового пластика, гелей, перчаток, буферных растворов, мелкого лабораторного оборудования - электрофоретических камер, лабораторного стекла (колбы для плавления агарозы), автоматических пипеток и пр.) без тщательной упаковки в герметичные пластиковые мешки. Это относится и к случаям перемещения оборудования для проведения необходимого ремонта или замены.
Правила работы для персонала
1. Работы на этапе детекции продуктов амплификации проводят сотрудники, не занятые на других этапах ПЦР-исследований.
2. На каждом этапе ПЦР-исследования необходимо использовать индивидуальный набор соответствующего лабораторного оборудования, расходных материалов и одежды. Одноразовые перчатки подлежат смене при каждой новой операции. Работа без перчаток запрещена.
3. Запрещается перемещать личные вещи, лабораторные журналы, лабораторную одежду и канцелярские принадлежности между зонами лаборатории.
Работа с оборудованием
1. Миницентрифуги, вортексы, штативы для пробирок, автоматические пипетки, термостаты и маркерные карандаши являются принадлежностями определенного рабочего места и перемещению с места на место не подлежат.
2. Агарозные и полиакриламидные гели должны быть собраны в закрывающиеся контейнеры для дальнейшей утилизации.
3. Сменные наконечники для пипеток и полипропиленовые пробирки разрешается использовать только из заводской упаковки. Автоклавирование одноразового пластика не производится.
4. Для того, чтобы избежать аэрозольного загрязнения пипеток, использовать только наконечники с антиаэрозольными барьерными вставками.
Работа с реактивами
1. Серийные аликвоты реагентов должны быть пронумерованы и занесены в специальный журнал с указанием номера партии реактивов, из которой произведено аликвотирование, даты приготовления аликвот и лица, производившего разлив реагентов.
2. Перед работой с ДНК или перед переносом приготовленных к проведению реакции ПЦР смесей все исходные реагенты должны быть убраны в морозильную камеру, предназначенную для рабочих реактивов. Запрещается возвращать частично использованные реактивы в холодильник для хранения аликвот, равно как и в холодильник для хранения исходных растворов в промышленных упаковках.
3. Степень рабочего разведения для каждого типа положительного контроля определяется отдельно. Одновременно запрещается готовить разведения положительных и отрицательных контролей на одном и том же рабочем месте. При добавлении ДНК в готовые реакционные смеси первым следует добавлять отрицательный контроль (контроли), далее - исследуемый материал, а положительный контроль - в последнюю очередь.
10. Организация рабочих мест
Общие требования
1. Исследования по идентификации ГМИ растительного происхождения могут проводиться на базе лабораторий, проводящих исследования методом ПЦР с патогенными биологическими агентами. В таком случае должно быть предусмотрено лишь разграничение исследований во времени. При организации исследований по идентификации ГМИ необходимо предусмотреть наличие вспомогательных помещений (комнаты ведения учетной документации; раздевалки для сотрудников, комнаты приема пищи, туалеты, подсобные помещения), которые могут быть общими с другими подразделениями учреждения. Курение и прием пищи на рабочих местах строго запрещен. Для приема пищи выделяется отдельное помещение, вход в которое в лабораторной одежде запрещен.
2. Для сотрудников лаборатории должна быть предусмотрена спецодежда: медицинский халат, шапочка, перчатки и сменная обувь. При работе в помещении детекции продуктов амплификации следует надевать бахилы.
3. Пробирки с продуктами ПЦР и использованные наконечники к микродозаторам подвергаются первичной обработке растворами, вызывающими деградацию ДНК.
4. По окончании работ обрабатывают рабочие поверхности растворами, вызывающими деградацию ДНК (например 0,2%-ный раствор ДП-2Т или аналогичный ему). Перед началом работ рабочую поверхность столов дополнительно обрабатывают 70%-ным этиловым спиртом. Ежемесячно проводят профилактическую обработку рабочей поверхности столов и штативов 1 N соляной кислотой.
Во всех помещениях лаборатории ежедневно должна проводиться влажная уборка. Для каждого этапа проведения исследований должен быть выделен индивидуальный набор уборочного инвентаря. Уборочный инвентарь запрещается использовать для уборки других помещений.
Нормативные ссылки
1. Федеральный закон N 52-ФЗ "О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения" от 30 марта 1999 г.
2. Федеральный закон N 2-ФЗ "О внесении изменений и дополнений в Закон Российской Федерации "О защите прав потребителей" и Кодекс РСФСР об административных правонарушениях" от 9 января 1996 г. (ред. от 30.12.01).
3. Федеральный закон N 29-ФЗ "О качестве и безопасности пищевых продуктов" от 02.01.00.
4. Федеральный закон N 86-ФЗ "О государственном регулировании в области генно-инженерной деятельности" от 05.06.96 (ред. от 12.07.00).
5. Федеральный закон N 96-ФЗ "О внесении изменений и дополнений в Федеральный закон о государственном регулировании в области генно-инженерной деятельности" от 21.06.00.
6. "Основы законодательства Российской Федерации об охране здоровья граждан" от 22 июля 1993 г. N 5487-1 (ред. от 30.06.03).
7. Положение о государственном санитарно-эпидемиологическом нормировании, утвержденное постановлением Правительства Российской Федерации N 554 от 24.07.00.
8. Положение о Государственной санитарно-эпидемиологической службе Российской Федерации, утвержденное постановлением Правительства Российской Федерации N 554 от 24.07.00.
9. Постановление Главного государственного санитарного врача Российской Федерации N 7 от 6 апреля 1999 г. "О порядке гигиенической оценки и регистрации пищевой продукции, полученной из генетически модифицированных источников".
10. Постановление Главного государственного санитарного врача Российской Федерации N 149 от 16.09.03 "О проведении микробиологической и молекулярно-генетической экспертизы генетически модифицированных микроорганизмов, используемых в производстве пищевых продуктов".
11. Гигиенические требования к безопасности и пищевой ценности пищевых продуктов. СанПиН 2.3.2.1078-01.
12. Постановление Главного государственного санитарного врача Российской Федерации от 08.11.00 N 14 "О порядке проведения санитарно-эпидемиологической экспертизы пищевой продукции, полученной из генетически модифицированных источников".
13. Приказ N 325 МЗ РФ от 15.08.01 (ред. от 18.03.02) "О санитарно-эпидемиологической экспертизе продукции" (зарегистрированный в МЮ РФ 19.10.01 N 2978).
Библиографические данные
1. Lipp M., Brodman P., Pietsch et al IUPAC Collaborative Trial Study of a Method to detect Genetically Modified Soy Beans and Maize in Dried Powder //Journal of АО AC International-1999. V. 82. N 4. P. 923-929.
2. Meyer R., Jaccaud E. Detection of genetically modified soya in processed food products: development and validation of a PCR assay for the specific detection of Glyphosate- Tolerant Soybeans. Proceedings of the EURO FOOD CHEM IX Conference, Interlaken, Switzerland, 1997/- Event N 220 (1). H. 23-28.
3. Zimmermann A., Liniger M., Luthy J. et al A sensitive detection method for genetically modified MaisGard TM corn using a nested- PCR system. Lebensm.-Wiss.U.-Technol. 1998. N 31. P. 664-667.
4. Studer E., Dahinden I., Luthy J., Hubner P. Nachweis des gentechnisch veranderten "Maximizer" Mais mittels der Polymerase-Kettenreaktion (PCR) //Mitteilungen aus dem Gebiet der Lebensmittel und Hygiene. 1997, 88, 515-524.
5. Jaccaud E., Honne M., Meyer R. Assessment of Screening Methods for the Identification of Genetically Modified Potatoes in Raw Materials and Finished Progucts//J.Agric. Food Chem. 2003, 51, 550-557.
6. Yap E.P.H., Lo Y.-M.O., K. A. Fleming K. A., McGee J.O'D. False-positives and Contamination in PCR. In: PCR Technology, Current Innovations. Ed. G.Griffin, A.M.Griffin, CRC Press, 1994).
| Главный государственный санитарный врач Российской Федерации, Первый заместитель Министра здравоохранения Российской Федерации | Г.Г. Онищенко |
Приложение 1
(обязательное)
 | |
| 1839 × 1777 пикс. Открыть в новом окне | |