Исследование повторных проб. Принцип метода состоит в повторном исследовании нескольких случайно выбранных проб, число которых пропорционально количеству проводимых исследований.
Сравнивая соответствующие пары результатов, получают объективные данные о качестве проведенных исследований. Повторные исследования проб должны проводиться после выполнения анализов текущего дня.
При применении этого метода 5% образцов должны исследоваться повторно.
Метод повторных определений дает возможность оценить качество работы аппаратуры и лаборанта во время исследований. Метод может использоваться в любой лаборатории вне зависимости от количества производимых анализов. Недостатком его является невозможность контроля правильности полученных результатов.
Пробы, выдранные для повторных исследований, могут исследоваться и на следующий день с целью калибровки аппаратуры. Для консервации клеток крови добавляют ЭДТА из расчета 1 - 2 мг на 1 мл крови. Хранить пробы необходимо при 4 град.С.
Исследование смешанной пробы. При оценке воспроизводимости методом дублированных проб получают более близкие значения, чем обычно получают при наличии случайных ошибок. В методе смешанной пробы это исключено. Метод состоит в следующем: из группы образцов случайно выбирают два (А и В); из каждого образца А и В берут равные объемы и смешивают (образец С); исследуют все три образца.
Таблица 6
Определение воспроизводимости по смешанным пробам
┌───────────────────┬──────┬───────┬───────┬───────────┬────────────────┐
│ │ │ │ │ А + В │ │
│ Компонент │ А │ В │ С │ ─────── │ Различие* │
│ │ │ │ │ 2 │ │
├───────────────────┼──────┼───────┼───────┼───────────┼────────────────┤
│Гемоглобин │ 125 │ 142 │ 130 │ 133,5 │ 3,5 │
│ │ │ │ │ │ │
│Гематокрит │ 47 │ 52 │ 50 │ 49,5 │ 0,5 │
└───────────────────┴──────┴───────┴───────┴───────────┴────────────────┘
┌───────────────────┬──────┬───────┬───────┬───────────┬────────────────┐
* Различие между величиной, полученной в смешанной пробе (С), и
А + В
теоретической величиной ─────── .
2
Для построения контрольной карты по этому методу рекомендуют проводить исследования смешанных проб в течение 40 дней.
Метод средней нормальных величин (по данным больных)
Метод основан на статистическом анализе результатов проб больных. Предполагается, что средняя величина, полученная по данной методике за один день или за определенное время, при большом объеме работы лаборатории (не менее 30 определений) приблизительно постоянна изо дня в день. Если в выполнении анализа вкрадывается систематическая ошибка, то это выразится в сдвиге средней величины результатов.
Для построения контрольной карты необходимо в течение 20 дней ежедневно рассчитывать среднюю нормальных величин данного компонента, где _ нормальную область рассматривают в пределах Х +- 2S. Величины, выходящие за эти пределы, отбрасывают. Затем следует рассчитать среднюю и среднеквадратическое отклонение средних за 20 дней и ошибку средних для группы нормальных величин. _
Затем рассчитывают контрольные пределы Х +- 2m. Выбор пределов 2m, а не 3m, делает метод более чувствительным и увеличивает частоту выявления внеконтрольных величин.
После построения контрольной карты ежедневно находят среднюю нормальных результатов данного компонента и откладывают на карте. Чем больше результат входит в расчет средней, тем более эффективной становится средняя в определении действительной области.
Метод средней нормальных величин дает возможность обнаруживать ошибки, не выявленные другими методами контроля, и является действительным контролем на всех этапах исследования проб больных.
Межлабораторный контроль качества
Лаборатории, систематически участвующие в межлабораторном контроле качества гематологических исследований, могут использовать результаты контроля для оценки качества своей работы. Особенно ценными являются долгосрочные контрольные опыты.
Рассчитанное статически среднеквадратическое отклонение результатов данной лаборатории можно рассматривать как оценку точности в выполнении отдельного теста, а индекс среднеквадратического отклонения (IS) - как отражение способности лаборанта правильно выполнять анализы.
Осуществление контроля качества отдельных гематологических параметров
Контроль качества исследований содержания гемоглобина. Для контроля качества определения гемоглобина используют стандартные растворы гемиглобинцианида с известным содержанием гемоглобина и специальные контрольные растворы (донорская кровь, гемолизированная кровь и консервированная кровь).
Стандартный раствор гемиглобинцианида (производство фирмы "Reanal", ВНР) используют для контроля правильности работы фотометров и построения калибровочной кривой при использовании гемиглобинцианидного метода определения гемоглобина в крови. Определение гемоглобина проводится фотометрическим методом путем определения содержания Hb по калибровочной кривой, выведенной для каждого прибора по серии стандартных растворов гемиглобинцианида с известной концентрацией гемоглобина.
Раствор гемолизированной крови. Для контроля воспроизводимости определения гемоглобина применяют растворы гемолизированной крови. Гемолизаты готовят из донорской крови (цитратной), можно с истекшим сроком годности, человеческой или лошадиной. Гемолизаты являются контролем на весь процесс исследования и используются при определении гемоглобина гемиглобинцианидным методом.
Основными требованиями к гемолизирующим веществам и растворителям являются следующие:
1) они должны быть бесцветными и прозрачными и не вступать в реакцию с красящими веществами крови;
2) величина разведения должна быть под контролем (рекомендуют 1% раствор крови).
Оптически прозрачные растворы готовят при помощи центрифугирования или используя некоторые растворы веществ: 0,1%, 0,25%, 0,4% растворы щелочи, 50% растворы мочевины, раствор сапонина и др. (ГОСТ 4212-76).
Раствор гемолизированной крови стабилен не менее года при условии хранения в холодильнике в темной посуде.
Для оценки воспроизводимости определений гемоглобина гемолизат _ исследуют в течение 20 дней, из полученных данных рассчитывают Х, S, V, _ контрольные пределы (Х +- 2S) и строят контрольную карту. Коэффициент вариации не должен превышать 5%.
Для использования гемолизата в целях контроля правильности следует установить точную концентрацию гемоглобина в данном гемолизате.
Ограничения применения гемолизата:
1) дефицитность крови,
2) трудоемкость приготовления стерильного и гомогенного раствора в условиях лаборатории.
Для определения количества гемоглобина пользуются также колориметром простейшего устройства - гемометром Сали.
Доводку и коррекцию гемометров Сали производят, определяя одновременно содержание гемоглобина в данной пробе крови спектрофотометрически циангемиглобиновым методом. При этом производят 6 определений: в неразведенной крови и в разведениях 1:2, 1:3, 1:4, 1:5 и 1:6. Это необходимо потому, что результаты, полученные по методу Сали, не подчиняются закону Ламберта-Бера. Полученные данные наносят на систему координат (на листе миллиметровой бумаги), обозначая на ней также результаты, полученные циангемиглобиновым методом. Построенную кривую используют для вычисления результатов при последующих определениях до новой проверки гемометра. Если нет спектрофотометра, то измерение можно провести и на обычном фотометре, но с меньшей точностью.
Гемометр Сали является аналитически недостаточно надежным, и из-за своего несовершенства является источником многих ошибок.
Контроль качества подсчета клеток крови
К контрольным материалам, применяемым для контроля качества подсчета клеток крови, предъявляется ряд дополнительных требований:
1. Материал должен легко приводиться в гомогенное состояние, не агглютинироваться.
2. Физиологические константы и реологические свойства материала, находящегося в растворе жидкости (вязкость, плотность, индекс рефракции, электропроводность), должны соответствовать этим параметрам в крови, а форма и размер частиц - аналогичным клеткам крови.
3. Контрольный материал должен быть химически инертным.
Методики приготовления контрольных материалов изложены ниже.
Контроль качества подсчета количества эритроцитов
Контроль качества определения эритроцитов с помощью контрольных материалов осуществляется по принципу опосредованного контроля методом контрольных карт (табл. 7).
В течение 2 дней проводят 20 определений количества эритроцитов в консервированной крови, рассчитывают контрольные пределы и строят контрольную карту. Неудовлетворительная воспроизводимость результатов может быть обусловлена тем, что существуют объективные причины неточностей при определении количества эритроцитов в крови: