Методика приготовления контрольных материалов
Контрольный материал, приготовленный по одной из описанных ниже методик, обрабатывают и исследуют так же, как и пробы больных. Ошибки самого исследования нужно отличать от ошибок, присущих материалу. Для этого нужно быть в полной уверенности, что в результате хранения не произошло таких изменений материала, которые превысили бы воспроизводимость самого метода исследования.
Внутрилабораторный контроль воспроизводимости результатов гематологических параметров осуществляется по общепринятому методу контрольных проб с построением контрольных карт и последующим ежедневным откладыванием значений контрольных проб.
Для определения истинных значений числа клеток в контрольных материалах используют прямой подсчет разведенного материала в камере для подсчета клеток. Этот метод является достаточно точным при применении проверенных (откалиброванных) камер и проведении довольно большого числа подсчетов для снижения случайных ошибок исследования. Средняя арифметическая из числа подсчетов является критерием для оценки правильности исследований.
1. Контрольные материалы для исследований гемоглобина
Приготовление раствора гемолизата. Для приготовления гемолизата используют:
1) консервированную человеческую кровь (цитратную), можно с истекшим сроком годности;
2) консервированную лошадиную кровь;
3) донорскую человеческую кровь, свежую, собранную в сосуд с 0,6 моль/л раствором лимоннокислого натрия из расчета 1:5.
200 мл полученной цитратной крови центифугируют при 3.000 об/мин в течение 30 мин. Плазму сливают. К эритроцитам добавляют 100 мл стерильной дистиллированной воды и тщательно перемешивают на магнитной мешалке в течение 30 мин. Раствор помещают в холодильник при -20 град.С на 24 часа. На следующий день раствор размораживают и вновь тщательно перемешивают в течение 30 мин.
Затем раствор фильтруют в асептических условиях через стеклянный фильтр millipore (соответствует N 4 - с величиной пор 4 - 10 мкм - отечественного производства) и разливают в стерильные бутылочки по 1 мл. Хранят раствор в холодильнике, оптимальная температура -20 град.С. Стабилен в течение года.
Гемолизат используется для контроля воспроизводимости результатов определения гемоглобина с помощью контрольных карт. При наличии в лаборатории контрольного материала с известным содержанием гемоглобина в растворе гемолизата можно определить точную величину гемоглобина и использовать для контроля правильности.
При определении концентрации гемоглобина в крови необходимо избегать следующих ошибок.
1. При взятии крови:
а) использование неточно откалиброванных пипеток (0,02 мл),
б) неточное заполнение капилляра кровью,
в) неточное пипетирование физиологического раствора и крови.
2. При разведении:
а) использование неточно откалиброванной пипетки (5,0 мл),
б) недостаточно чистая посуда (следы крови),
в) недостаточное прополаскивание реактивом,
г) неточное пипетирование реактивов,
д) использование старых, неправильно приготовленных реактивов.
3. При измерении:
а) использование неоткалиброванного прибора,
б) использование грязных или непарных кювет,
в) мутность растворенной пробы.
II. Контрольные материалы для подсчета числа эритроцитов
1. Консервированная кровь. Консервированную кровь сохраняют вне организма в течение длительного срока с поддержанием всех биологических и функциональных свойств. Консервированная кровь должна сохраняться без явлений деструкции эритроцитов.
Для приготовления консервированной крови в качестве стабилизаторов используются антикоагулянты, и на основе этих веществ предложены следующие консервирующие растворы (рН растворов доводят до требуемого значения 0,1 моль/л NaOH):
I. 1) Натрий лимоннокислый (цитрат натрия) - 2 г ч, чда.
2) D (+) - Глюкоза - 3,0 г, безводная, ч, чда.
3) Левомицетин - 0,075 г фарм.
4) Бидистиллированная вода - до 100 мл.
рН раствора доводится до 4,5 - 5,1. Консервированная кровь готовится путем добавления к крови консервирующего раствора в отношении 4:1.
II. 1) Лимонная кислота - 1,0 г, чда, хч.
2) D (+) - Глюкоза - 3,0 г, безводная, ч, чда.
3) Натрий фосфорнокислый трехзамещенный - 0,75 г, ч, чда.
4) Бидистиллированная вода - до 100 мл.
рН раствора доводят до 5,7 (5,5 - 6,0). Консервированную кровь готовят путем добавления к крови консервирующего раствора в отношении 4:1.
III. 1) Глюкоза - 25 г, безводная, ч, чда.
2) Натрий лимоннокислый - 22 г, чда.
3) Лимонная кислота - 8 г, ч, чда, хч.
4) Бидистиллированная вода - до 1000 мл.
рН раствора доводится до 6,4. Консервированная кровь готовится путем добавления к крови консервирующего раствора в отношении 3:1.
IV. 1) D (+) - Глюкоза - 2,0 г, безводная, ч, чда.
2) Натрий лимоннокислый - 300,0 г., ч, чда.
3) Натрий фосфорнокислый безводный однозамещенный - 0,15 г, ч, чда.
4) Бидистиллированная вода - до 1000 мл.