рН раствора доводится до 6,9. Консервированная кровь готовится путем добавления к крови консервирующего раствора в отношении 2:1.
V. 1) D (+) - Глюкоза - 20,5 г, безводная, ч, чда.
2) Натрий лимоннокислый - 8,0 г, ч, чда.
3) Лимонная кислота - 0,55 г, ч, чда, хч.
4) Натрий хлористый - 4,2 г, ч, чда, хч.
5. Бидистиллированная вода - до 1000 мл.
рН раствора доводится до 6,1. Консервированная кровь готовится путем добавления к крови консервирующего раствора в отношении 4:1.
В консервированных растворах эритроциты сохраняют свои функциональные и биологические свойства в течение нескольких дней при 20 град.С, а в условиях холодильника - до 20 - 30 дней.
Суспензия фиксированных эритроцитов. При фиксации эритроцитов происходят физико-химические изменения в мембране эритроцитов, что предохраняет клетки от лизиса. В качестве фиксирующего материала предложены формальдегид, танин, глутаральдегид, ледяная уксусная кислота.
Наибольшее распространение получила методика фиксации эритроцитов глутаральдегидом. После фиксации размер клеток изменяется в течение первых 3 - 4 дней, затем остается стабильным от нескольких месяцев до нескольких лет.
Методика приготовления. Кровь собирают в сосуд с антикоагулянтом ЭДТА (5 мг сухого ЭДТА на 1 мл крови). Затем трижды промывают изоосмотическим фосфатным буфером. Для этого к собранной крови добавляют раствор буфера в 2 раза больше объема крови и полученную суспензию центрифугируют в течение 10 мин при 3000 об/мин. Промытые эритроциты фиксируют 0,25% раствором глутаральдегида в фосфатном буфере, который постепенно добавляют к эритроцитам в отношении 1:10 (кровь: фиксирующий раствор). Фиксация производится при комнатной температуре в течение часа. Фиксированные эритроциты трижды промывают дистиллированной водой и доводят до окончательного объема водой или 12,5% раствором глицина. Затем добавляют 3 мл 1% раствора азида натрия. Тщательно перемешивают на магнитной мешалке в течение 30 минут и разливают в стерильные стеклянные пузырьки по 2 - 5 мл. Хранение проводят при 4 град.С. Перед использованием материал перемешивают на магнитной мешалке в течение 10 мин.
Приготовленную суспензию хранят в темных склянках в холодильнике при 4 град.С. Срок хранения - от 6 месяцев до 1 года. Суспензию используют для контроля качества подсчета эритроцитов автоматическим и камерным методами.
Приготовление изоосмотического фосфатного буфера 154 ммоль/л, рН 7,4:
0,246 г однозамещенного фосфорнокислого калия и 3,187 г двузамещенного фосфорнокислого калия трехводного растворяют дистиллированной водой в мерной колбе на 100 мл.
Ограничения применения консервированной крови и фиксированных клеток крови
1. Дефицитность крови.
2. Фиксированные эритроциты обладают большей вязкостью по сравнению с кровью (прилипают к стенкам и не переходят в состояние суспензии).
3. При фиксировании клеток изменяется их электрический заряд, что влияет на правильность результатов при автоматическом подсчете клеток.
4. Фиксированные клетки более регидны, что затрудняет их прохождение через отверстия анализатора и меняет амплитуды пульсовой волны (при автоматическом подсчете).
5. В первые 3 - 5 дней происходит уменьшение объема фиксированных эритроцитов, затем их размеры остаются стабильными в течение 6-ти месяцев.
6. Дефицитность реактивов (глутаральдегида и азида натрия).
При подсчете количества клеток крови следует избегать следующих ошибок.
1. При взятии крови:
а) использование неточно откалиброванных пипеток;
б) неточное пипетирование и разведение крови,
в) недостаточно быстрый забор крови и размешивание ее с реактивом для разведения.
2. При разведении:
а) неточное пипетирование реактива для разведения,
б) использование грязной посуды и пипеток,
в) использование неточно откалиброванных пипеток,
г) использование некачественного реактива для разведения, вызывающего гемолиз эритроцитов.
3. При измерении:
а) несоблюдение правил подготовки счетной камеры,
б) несоблюдение временных промежутков при подсчете количества эритроцитов в камере, необходимых для оседания клеток на сетку,
в) нетщательное перемешивание крови перед заполнением камеры,
г) подсчет клеток в недостаточном количестве квадратов и несоблюдение правил подсчета,
д) использование неоткалиброванного прибора при автоматическом подсчете клеток.
Метод сохранения мазков для многократного микроскопирования
К 0,5 мл клея БФ-6 прибавляют 3 мл абсолютного спирта, 3 мл бутилового спирта и тщательно перемешивают до получения прозрачной жидкости с желтоватым оттенком. Хранят в склянке с хорошо притертой пробкой.
На предметное стекло с мазком наносят пипеткой большую каплю пленкообразующей смеси и, покачивая стекло, дают ей равномерно растечься по его поверхности. Избыток смеси с края стекла удаляют и препарат кладут на горизонтальную поверхность для высушивания. При комнатной температуре пленка высыхает за 15 - 20 мин. Для ускорения сушки мазок можно поместить в термостат при 60 град.С.
| Начальник Главного управления лечебно-профилактической помощи | А.М. Москвичев |
Приложение 3
к приказу Минздрава СССР
от 23 апреля 1985 г. N 545
Методические указания по осуществлению контроля качества исследований мочи
I. Общие положения
При осуществлении контроля качества исследований мочи следует руководствоваться "Методическими указаниями по осуществлению контроля качества работы клинико-диагностических лабораторий" (приложение к приказу МЗ СССР N 380 от 16 апреля 1975 г. "О состоянии и перспективах развития лабораторной клинико-диагностической службы в стране").
Степень точности получаемых результатов исследований мочи, в основном, зависит от квалификации лаборанта, используемого оборудования, реактивов и метода исследования.
Для получения правильных и воспроизводимых результатов исследования химического состава мочи используют контрольные материалы, близкие по возможности к образцам мочи пациентов, и контрольные мазки для контроля качества микроскопических исследований осадка мочи.
Концентрация исследуемых веществ в контрольном материале должна соответствовать практической чувствительности используемого метода исследования.