5.3.3 Подготовка хроматографической колонки для очистки от жиров - по 4.3.3.
5.3.4 Приготовление градуировочных растворов пестицидов
Основные градуировочные растворы с массовой концентрацией (100±0,5) мкг/см
готовят весовым способом отдельно для каждого пестицида путем растворения навески 10 мг в мерной колбе вместимостью 100 см в гексане. Из основных растворов готовят промежуточные градуировочные растворы массовых концентраций: 1 мкг/см (раствор 1), 0,1 мкг/см (раствор 2) и 0,01 мкг/см (раствор 3), перенося пипеткой в мерные колбы вместимостью 100 см соответственно 1 и 0,1 см основного раствора пестицида. Для приготовления промежуточного раствора 3 с содержанием 0,01 мкг/см в мерную колбу вместимостью 100 см переносят 1 см промежуточного раствора 1 и доводят до метки гексаном.
готовят весовым способом отдельно для каждого пестицида путем растворения навески 10 мг в мерной колбе вместимостью 100 см в гексане. Из основных растворов готовят промежуточные градуировочные растворы массовых концентраций: 1 мкг/см (раствор 1), 0,1 мкг/см (раствор 2) и 0,01 мкг/см (раствор 3), перенося пипеткой в мерные колбы вместимостью 100 см соответственно 1 и 0,1 см основного раствора пестицида. Для приготовления промежуточного раствора 3 с содержанием 0,01 мкг/см в мерную колбу вместимостью 100 см переносят 1 см промежуточного раствора 1 и доводят до метки гексаном. Все промежуточные растворы стабильны при хранении в колбах с притертой пробкой в холодильнике в течение 6
мес.
5.3.5 Подготовка газового хроматографа
5.3.5.1 Подготовка хроматографической колонки
Сухую стеклянную колонку, предварительно промытую хромовой смесью, этиловым спиртом, затем диэтиловым эфиром, заполняют носителем с помощью вакуумного или водоструйного насоса. При этом набивку колонки периодически уплотняют, постукивая по колонке деревянной палочкой. Установленную в термостате хроматографическую колонку перед работой кондиционируют в следующем режиме: 2 ч при 100 °С; 2 ч при 150 °С; 4 ч при 200 °С; 4 ч при 220 °С. При кондиционировании колонка должна быть отключена от детектора. Кондиционирование следует проводить при смене колонки, а также после длительных перерывов в работе.
5.3.5.2 Приготовление шкалы градуировочных растворов
В пробирках вместимостью 5 см с пробками на шлифах для каждого пестицида готовят шкалу градуировочных растворов (см. таблицы 2, 3, 4). Для этого пипетками вносят определенный объем промежуточных растворов пестицидов и недостающий до 5 см объем гексана.
с пробками на шлифах для каждого пестицида готовят шкалу градуировочных растворов (см. таблицы 2, 3, 4). Для этого пипетками вносят определенный объем промежуточных растворов пестицидов и недостающий до 5 см объем гексана. Таблица 2 - Шкала градуировочных растворов для альфа-ГХЦГ и 4,4'-ДДЭ
| Характеристика раствора | Номер градуировочного раствора | |||||||
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | |
| Объем промежуточного раствора 3 (0,01 мкг/см ), см | 1 | 2 | 5 | - | - | - | - | - |
| Объем промежуточного раствора 2 (0,1 мкг/см ), см | - | - | - | 1 | 2 | 3 | 4* | 5* |
| Объем гексана, см | 4 | 3 | 0 | 4 | 3 | 2 | 1 | 0 |
| Массовая концентрация пестицида в полученном градуировочном растворе, мкг/см | 0,002 | 0,004 | 0,01 | 0,02 | 0,004 | 0,06 | 0,08* | 0,1 |
Масса пестицида в 5 мкл хроматографируемой пробы, нг (10 мкг) | 0,01 | 0,02 | 0,05 | 0,1 | 0,2 | 0,3 | 0,4* | 0 |
| * Только для 4,4'-ДДЭ. | ||||||||
Таблица 3 - Шкала градуировочных растворов для гамма- и бета-ГХЦГ, альдрина и гептахлора
| Характеристика раствора | Номер градуировочного раствора | ||||||
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | |
| Объем промежуточного раствора 3 (0,01 мкг/см ), см | 3 | 5 | - | - | - | - | - |
| Объем промежуточного раствора 2 (0,1 мкг/см ), см | - | - | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 |
| Объем гексана, см | 2 | 0 | 4 | 3 | 2 | 1 | 0 |
| Массовая концентрация пестицида в полученном градуировочном растворе, мкг/см | 0,006 | 0,01 | 0,02 | 0,02 | 0,06 | 0,08 | 0,1 |
| Масса пестицида в 5 мкл хроматографируемой пробы, нг (10 мкг) | 0,03 | 0,05 | 0,1 | 0,2 | 0,3 | 0,4 | 0,5 |
Таблица 4 - Шкала градуировочных растворов для 4,4'-ДДТ, 4,4'-ДДД и кельтана
| Характеристика раствора | Номер градуировочного раствора | |||||||
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | |
| Объем промежуточного раствора 2 (0,1 мкг/см ), см | 0,5* | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | - | - |
| Объем промежуточного раствора 1 (1 мкг/см ), см | - | - | - | - | - | - | 1 | 2** |
| Объем раствора гексана, см | 4,5 | 4 | 3 | 2 | 1 | 0 | 4 | 3 |
| Массовая концентрация пестицида в полученном растворе, мкг/см | 0,01* | 0,02 | 0,04 | 0,06 | 0,08 | 0,1 | 0,2 | 0,4** |
| Масса пестицида в 5 мкл хроматографируемой пробы, нг (10 мкг) | 0,05* | 0,1 | 0,2 | 0,3 | 0,4 | 0,5 | 1 | 2** |
| * Только для 4,4'-ДДД. ** Только для 4,4'-ДДТ. | ||||||||
Градуировочные растворы хранят не более двух недель. При проверке градуировочных графиков готовят свежие градуировочные растворы.
5.4 Проведение анализа
5.4.1 Взятие навески пробы продукта и подготовку экстракта пестицидов проводят по 4.4.1-4.4.3.
5.4.2 Сухой остаток, полученный по 5.4.1, растворяют в 10 см гексана.
гексана. 5.4.3 Условия хроматографирования
5 мкдм гексанового раствора вводят в испаритель газового хроматографа и анализируют в условиях, указанных в таблице 5.
гексанового раствора вводят в испаритель газового хроматографа и анализируют в условиях, указанных в таблице 5. Таблица 5 - Условия газохроматографического разделения хлорорганических пестицидов на различных колонках
| Параметр | Колонка 1 | Колонка 2 | Колонка 3 | |||
| Насадка колонки | 5% OV-17 на хроматоне N-AW-DMCS (0,16-0,20 мм) | 3% OV-210 на хроматоне N-супер (0,125-0,16 мм) | 5% SE-30 на хроматоне N-AW-DMCS (0,16-0,20 мм) | |||
| Длина колонки (см) и внутренний диаметр (мм) | 100 3 | 100 3 | 100 3 | 100 3 | 150 3 | 150 3 |
| Температура колонки, °С | 170 | 210 | 160 | 190 | 190 | 190 |
| Температура испарителя, °С | 220 | 220 | 220 | 220 | 210 | 210 |
| Температура детектора, °С | 230 | 230 | 230 | 230 | 230 | 230 |
| Скорость потока газа-носителя, см /мин | 40 | 40 | 35 | 35 | 60 | 60 |
| Рабочая шкала электрометра, А | 6,4·10 | 6,4·10 | 6,4·10 | 6,4·10 | 6,4·10 | 6,4·10 |
| Скорость протяжки ленты самописца, мм | 200 | 200 | 200 | 200 | 200 | 200 |
| Объем вводимой пробы, мкл | 5 | 5 | 5 | 5 | 5 | 5 |
| Время удерживания пестицидов: | ||||||
| альфа-ГХЦГ | 3 мин 10 с | 3 мин 15 с | 1 мин 20 с | |||
| бета-ГХЦГ | 4 мин 23 с | 5 мин 24 с | 2 мин 10 с | |||
| гамма-ГХЦГ | 5 мин 32 с | 4 мин 22 с | 2 мин 10 с | |||
| кельтан | 12 мин 14 с | 4 мин 50 с | ||||
| гептахлор | 6 мин 02 с | 2 мин 40 с | ||||
| альдрин | 6 мин 30 с | 3 мин 28 с | ||||
| 4,4'-ДДЭ | 4 мин 03 с | 4 мин 37 с | ||||
| 4,4'-ДДД | 6 мин 03 с | 6 мин 56 с | ||||
| 4,4'-ДДТ | 7 мин 26 с | 11 мин 42 с | ||||
| Линейный диапазон определения, мг: | ||||||
| альфа-ГХЦГ | 0,01-0,20 | 0,03-0,30 | 0,03-0,20 | |||
| бета-ГХЦГ | 0,03-0,30 | 0,03-0,4 | 0,03-0,4 | |||
| гамма-ГХЦГ | 0,03-0,50 | 0,03-0,5 | 0,03-0,4 | |||
| альдрин | 0,02-0,2 | 0,01-0,3 | 0,02-0,2 | |||
| кельтан | 0,01-0,2 | 0,01-0,2 | 0,01-0,2 | |||
| гептахлор | 0,03-0,3 | 0,03-0,5 | 0,03-0,2 | |||
| 4,4'-ДДЭ | 0,05-0,5 | 0,01-0,1 | 0,05-0,5 | |||
| 4,4'-ДДД | 0,05-0,5 | 0,1-1,0 | 0,1-1,0 | |||
| 4,4'-ДДТ | 0,10-0,5 | 0,1-2,0 | 0,1-2,0 | |||
5.5 Обработка результатов
5.5.1 Содержание пестицидов 
, мг/кг, в анализируемом сырье или консервах вычисляют в соответствии с градуировочными графиками по формуле
, мг/кг, в анализируемом сырье или консервах вычисляют в соответствии с градуировочными графиками по формуле
, (2) где 
- масса пестицида, найденная по градуировочному графику, мкг;
- масса пестицида, найденная по градуировочному графику, мкг;
- общий объем раствора, из которого взята аликвота для хроматографирования, см ;
- масса анализируемой пробы, г;
- объем аликвоты, вводимой в хроматограф, мкдм . 5.5.2 Вычисления проводят до третьего десятичного знака. Окончательный результат округляют до второго десятичного знака.
5.6 За окончательный результат испытаний принимают среднеарифметическое значение результатов (
) двух параллельных измерений, расхождение между которыми по абсолютной величине не должно превышать 20% по отношению к среднеарифметическому при 
0,95.
) двух параллельных измерений, расхождение между которыми по абсолютной величине не должно превышать 20% по отношению к среднеарифметическому при 0,95. 5.7 Пределы возможных значений систематической составляющей погрешности измерений содержания пестицидов в любой пробе при допускаемых методикой изменениях влияющих факторов ±0,15 .
. 5.8 При измерении содержания пестицидов в овощах и фруктах, соках, компотах, пюре полнота обнаружения варьирует для альфа-ГХЦГ в пределах 75-89%, бета-ГХЦГ 73-85%, гамма-ГХЦГ (линдан) 77-88%, 4,4'-ДДТ 75-85%, 4,4'-ДДЭ 65-72%, 4,4'-ДДД 75-86%, гептахлора 70-89%, кельтана 73-85%, альдрина 80-95%.
5.9 Минимально обнаруживаемые количества анализируемых соединений с помощью газожидкостной хроматографии составляют: для альфа-, бета-, гамма-ГХЦГ - 0,001 нг, для гептахлора, альдрина и кельтана - 0,01 нг, для 4,4'-ДДТ, 4,4'-ДДЭ и 4,4'-ДДД - 0,6 нг.
5.10 Нижний предел измерения: 0,001 мг/кг для гамма-ГХЦГ, 0,005 мг/кг для кельтана и гептахлора, 0,007 мг/кг для ДДТ и его метаболитов.
5.11 Значение среднеквадратичного отклонения случайной составляющей погрешности измерений содержания пестицидов одной и той же пробы в разных лабораториях при допускаемых методикой изменениях влияющих факторов составляет 0,20 .
. 5.12 Расхождение между результатами измерений, выполненных в двух разных лабораториях, не должно превышать 40% по отношению к среднеарифметическому значению при 0,95.
0,95. якорь
6 Требования безопасности
Требования безопасности при анализе пестицидов следует соблюдать согласно "Правилам устройства, техники, производственной санитарии, противоэпидемического режима и личной гигиены при работе в лабораториях санитарно-эпидемиологических учреждений системы Минздрава", утвержденным 20.01.81 N 4225-81.
ПРИЛОЖЕНИЕ А (справочное). БИБЛИОГРАФИЯ
[1] ТУ 25-1173-102-84 Испаритель ротационный
[2] ТУ 64-1-2451-78 Аппарат универсальный для встряхивания жидкостей в колбах и пробирках АВУ-6с
[3] ТУ 6-09-1705-82 Фильтры обезжиренные, желтая лента
[4] ТУ 25-11-17-89 Пластины для тонкослойной хроматографии "Сорбфил"
[5] ТУ 6-09-3375-78 Реактивы. Гексан
[6] ТУ 6-09-4236-76 Реактивы. Хлороформ
[7] ТУ 6-09-3534-76 Реактивы. Ацетонитрил