После окончания экстракции объединенные экстракты высушивают над безводным сульфатом натрия не менее суток.
4.4. Концентрирование экстрактов
Высушенный гексановый экстракт фильтруют небольшими порциями в круглодонную колбу вместимостью 500 мл и отгоняют растворитель в вакууме водоструйного насоса в токе азота или гелия на водяной бане при температуре 35-37°С до объема 2-3 мл. Применение вакуумной смазки или других смазочных материалов не допускается. Сконцентрированный экстракт количественно переносят стеклянным капилляром в пробирку на 5 мл и измеряют его объем. Полученный раствор используют для анализа на хроматографе. Допускается хранение экстракта в течение месяца при температуре 0-4°С.
4.5. Концентрирование экстрактов и проведение этерификации 2,4-Д
4.5.1. Концентрирование экстрактов
Высушенный экстракт 2,4-Д в изобутилацетате (н-бутилацетате) фильтруют в круглодонную колбу на 500 мл и отгоняют растворитель в вакууме водоструйного насоса в токе азота (или инертного газа) на водяной бане температурой 55-60°С до объема 10-15 мл. Остаток количественно переносят в грушевидную колбу на 25 мл и отгоняют изобутилацетат досуха в аналогичных изложенным выше условиях.
4.5.2. Проведение этерификации 2,4-Д
К сухому остатку, полученному в колбе после отгонки изобутилацетата, добавляют сначала 1 мл бутилового спирта, затем 0,5 мл концентрированной серной кислоты. Колбу с реакционной смесью закрывают притертой стеклянной пробкой и помещают на 20 мин на кипящую водяную баню. После этого колбу охлаждают до комнатной температуры и экстрагируют полученный 2,4-ДБЭ гексаном (4 мл) дважды по 2 мин. К объединенному гексановому экстракту добавляют 5 мл 10%-ного раствора сульфата натрия, энергично встряхивают 1-2 мин, затем водный слой отбрасывают, а гексановый экстракт фильтруют через 5-7 г безводного сульфата натрия в грушевидную колбу на 25 мл. Делительную воронку ополаскивают порцией гексана 2-3 мл, промывают этим же раствором сульфат натрия. Растворитель отгоняют в вакууме водоструйного насоса* в токе азота (или инертного газа) на водяной бане с температурой 35-37°С до конечного объема 2-3 мл, количественно переносят с помощью стеклянного капилляра в мерную пробирку на 5 мл и используют для анализа на хроматографе. Допускается хранение экстракта в течение месяца при температуре 0-4°С.
5. Проведение анализа
5.1. Схема проведения анализа
4-6 мкл экстракта, полученного согласно пп. 4.4, 4.5, вводят в испаритель хроматографа и записывают хроматограмму. После выхода пика 2,4-ДБЭ прибор оставляют в холостом режиме работы на 40-50 мин во избежание возможного оседания на колонке органических высокомолекулярных примесей, содержащихся в морской воде.
5.2. Холостое определение
Холостое определение проводят перед анализом проб воды. Цель определения - проверить чистоту реактивов и материалов, используемых для анализа. Для выполнения холостого определения берут тот же объем экстрагента (гексана, изобутилацетата), раствора серной кислоты, концентрацией 1 моль/л бутилового спирта и 10%-ного раствора сульфата натрия, что и для анализа одной пробы воды, и проводят с ними последовательно все операции, как описано в пп. 4.3, 4.4, 4.5.1 и 4.5.2.
При отсутствии пиков на хроматограмме холостого опыта холостое определение повторяют для каждой новой партии реактивов.
Если же на хроматограмме холостого опыта появляются пики с временами удерживания, близкими к временам удерживания исследуемых веществ, то необходимо путем постадийного исследования установить, какой из реактивов загрязнен, и заменить его таким же реактивом из другой партии.
Для проверки чистоты используемой посуды ее ополаскивают 3 мл гексана и 4-6 мкл полученного смывного раствора вводят в испаритель хроматографа. Отсутствие на хроматограмме пиков (кроме пика, соответствующего растворителю) служит доказательством чистоты посуды.
6. Подготовка средств измерений к работе
6.1. Методы приготовления градуировочных растворов 2,4-ДБЭ
6.1.1. Для приготовления стандартного раствора 2,4-ДБЭ ампулу со стандартным образцом (3 мг в 1 мл гексана) вскрывают и содержимое быстро переносят в мерную колбу вместимостью 50 мл с притертой пробкой. Ампулу промывают 2-3 раза гексаном и сливают в мерную колбу со стандартным образцом, после чего доводят гексаном ее до метки. Полученный раствор имеет концентрацию 60 мкг/мл.
Раствор стабилен при хранении в холодильнике в течение 6 месяцев.
6.1.2. Рабочий стандартный раствор 2,4-ДБЭ готовят непосредственно перед работой. Для этого 1 мл стандартного раствора 2,4-ДБЭ помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл с притертой пробкой и доводят гексаном до метки. Полученный раствор имеет концентрацию 1,2 мкг/мл.
6.2. Установление градуировочных характеристик метода
В хроматограф при условиях, подобранных согласно п. 6.4, вводят 6 мкл стандартного рабочего раствора 2,4-ДБЭ и определяют его время удерживания. Затем стандартный раствор разбавляют в 2; 4 и 8 раз. Для этого в мерные колбы вместимостью 25; 25 и 50 мл вносят соответственно 12,5; 6,25 и 6,25 мл рабочего стандартного раствора и доводят содержимое колбы до метки гексаном. Полученные растворы имеют концентрацию 0,6; 0,3 и 0,15 мкг/л. По 6 мкл каждого раствора вводят в испаритель хроматографа и записывают хроматограммы. Проводят количественный обсчет всех полученных хроматограмм и, построив для каждого компонента график зависимости площади пика от количества вещества, убеждаются в ее линейности для данного диапазона концентраций.
6.3. Подготовка хроматографической колонки
Стеклянную колонку длиной 1,8-2,0 м и диаметром 2,5 мм промывают этиловым спиртом и ацетоном, сушат и заполняют готовым носителем с нанесенной жидкой фазой. Для этого один конец колонки плотно закрывают небольшим тампоном из стекловаты, промытой ацетоном, затем кусочком марли и подсоединяют к водоструйному насосу. После этого через свободный конец заполняют колонку насадкой, прибавляя ее небольшими порциями и уплотняя постукиванием по колонке палочкой с резиновым наконечником при постоянно работающем насосе. Необходимо следить за тем, чтобы насадка ложилась равномерно, без пустот, с одинаковой плотностью. Заполненную колонку закрывают тампоном из стекловаты и помещают в термостат колонок хроматографа, не подсоединяя к детектору. Кондиционируют колонку в токе газа-носителя при расходе его 15-20 мл/мин при температуре 100°С в течение 6 ч и при температуре 200°С в течение 6-8 ч.
6.4. Подготовка газового хроматографа к работе
Подготовку хроматографа проводят в соответствии с инструкцией по эксплуатации.
Устанавливают с помощью пенного расходомера расход газа-носителя (азот) 25-28 мл/мин. Подсоединяют колонку к детектору и проверяют герметичность соединений, нанося на них кисточкой мыльную пену.
Устанавливают поступление в детектор азота со скоростью 115-125 мл/мин. Измеряют суммарный расход азота на выходе прибора и контролируют ежедневно перед началом работы.
Устанавливают температуру термостата колонок 175-190°С, испарителя 220-230°С, термостата детектора 240-250°С, устанавливают рабочий диапазон измерений на шкале электрометра и скорость диаграммной ленты (0,4-0,6 см/мин). При работе в рабочем диапазоне измерений электрометра высота пика 2,4-ДБЭ, соответствующая 4 мкл стандартного раствора с концентрацией 1,2 мкг/мл, должна составить не менее 1/3 шкалы самописца.
Критерием полноты кондиционирования газохроматографической колонки является соответствие дрейфа и нерегулярных шумов нулевой линии паспортным данным прибора.
Для насыщения колонки исследуемыми соединениями вкалывают подряд 5-7 раз по 6 мкл стандартного раствора 2,4-ДБЭ с концентрацией 1,2 мкг/мл, после чего колонка полностью готова для анализа.
Определение параметров колонки и детектора проводят аналогично описанному в гл. "Симм-триазиновые гербициды".
6.5. Определение характеристик линейности детектирования
Для определения характеристик линейности диапазона детектирования готовят стандартные растворы 2,4-ДБЭ шести концентраций, различающихся не более чем в два раза. По 4-6 мкл полученных растворов инжектируют в испаритель хроматографа и записывают хроматограммы на рабочей шкале электрометра. Рассчитывают площади пиков на полученных хроматограммах и определяют отношение концентрации 2,4-ДБЭ к площади пиков (K = С / S). Линейность детектирования сохраняется для концентраций, при которых значения K отличаются не более чем на 
. В случае отсутствия линейности детектирования строят градуировочный график для всех используемых диапазонов чувствительности.
. В случае отсутствия линейности детектирования строят градуировочный график для всех используемых диапазонов чувствительности.7. Выполнение измерений
В испаритель хроматографа вводят микрошприцем 4-6 мкл рабочего стандартного раствора 2,4-ДБЭ и записывают хроматограмму. Время удерживания рассчитывают по трем результатам хроматографирования. Этот параметр необходимо проверять ежедневно перед началом определений после выхода прибора на режим.
Затем вводят в испаритель 4-6 мкл экстракта проб, подготовленных согласно пп. 4.3, 4.4 и 4.5, 2,4-ДБЭ идентифицируют, сравнивая времена удерживания компонентов пробы морской воды с соответствующим параметром пика на хроматограмме стандартного раствора.
Условия хроматографирования смеси эфиров 2,4-Д приведены в табл. 45.
Таблица 45
Условия* хроматографирования смеси эфиров 2,4-Д
Параметр | Значение |
| 1. Длина хроматографической колонки, м | 2,0 |
| 2. Жидкая фаза, нанесенная на твердый носитель | OV-225 (5%) на хроматоне N-супер зернением 0,16-0,20 мм |
3. Расход газа-носителя (азота),  | |
| через колонку | 25-28 |
| через детектор | 115-125 |
| 4. Температурный режим, °С | |
| колонки | 165-175 |
| испарителя | 225-235 |
| детектора | 245-255 |
| 5. Рабочая шкала электрометра, А |  |
| 6. Скорость протяжки диаграммной ленты, мм/ч | 240 |
______________________________
* Условия приведены для газового хроматографа "Цвет-110".
Типичная хроматограмма некоторых эфиров 2,4-Д представлена на рис. 26. Времена удерживания относительно 2,4-ДБЭ приведены в табл. 46.
Таблица 46
Времена удерживания (относительно 2,4-ДБЭ) эфиров 2,4-Д
Эфир 2,4-Д | Относительное время удерживания |
| Метиловый | 0,44 |
| Этиловый | 0,52 |
| Бутиловый | 1,00 |
| Октиловый | 1,76 |